自然蛍光検出法を用いたラット副腎褐色細胞腫（PC12）細胞から放出されるドーパミン量の測定

抄録

ラット副腎褐色細胞腫（PC12）細胞は，神経伝達物質であるドーパミン及びノルアドレナリンの合成・放出能 をもつ株化細胞である．ドーパミンはチロシンを前駆体として合成され，ジヒドロキシフェニル酢酸（DOPAC）， 3- メトキシチラミン（3MT），ホモバニリン酸（HVA）に代謝される．また，ドーパミンは自然蛍光を持つことも 知られている．本研究では，自然蛍光検出法を用いてPC12 細胞内外のドーパミン及びその代謝物量の最適な測定 系を検討した． 　ドーパミン，セロトニン，及び，それらの代謝物は，高速液体クロマトグラフィーを用いて分離後，蛍光検出器 （HPLC-FL）を用いて検出した．励起波長 225 nm- 蛍光波長 310 nm の測定波長を用いた場合，ドーパミン，3MT， 及びHVA を測定することができ，一方，セロトニン及びその代謝物の影響を抑えることができた．ヘキサナール は，PC12 細胞からのドーパミン放出を促進する物質である．ヘキサナールでPC12 細胞を刺激し，細胞外ドーパ ミン，及び，その代謝物量を最適化した条件で測定した．そして，ヘキサナール刺激により細胞外に放出される ドーパミン量の増加，及び，細胞外 3MT 濃度の上昇を検出することができた． 　今後，様々な条件下においたPC12 細胞内外のドーパミン及びその代謝物量を測定し，ヘキサナールによるドー パミン放出の生理的意義の解明につなげていきたい．