ニワトリ胚子大脳培養細胞でのNO合成酵素の発現に及ぼすエタノールの影響

抄録

工タノールのNO合成酵素(NOS)活性に及ぼす影響について,ニワトリ胚子大脳培養細胞を用いて，組織学的，生化学的に検討した．培養細胞は，ホワイトレグホン受精卵の胚形成期3日目に10%工タノールを肺胞に投与し（工タノール群），一方では，生理的食塩液を投与（対照群）した13～14日齢の胚子から，大脳細胞を遊離し，常法に従い培養した．培養細胞における，NADPHジアホラーゼの発現は，ニトロブルーテトラゾリウム（NBT）を用いる染色法で行った．次いで，NOSの活性測定として,NBTを基質とし，NADPHを補酵素とするNADPHジアホラーゼ活性を測定した．また,[³H]アルギニンから[³H]シトルリンへの変換量(NOS活性)を測定し,NOS活性とした．1胚子大脳より，3～4×10⁶個の遊離細胞が得られ，その生存率は97%以上で，対照群，工タノール群ともに差はなかった．培養細胞の染色において，NADPHジアホラーゼ陽性の神経は，培養3日目頃から両群に観察されたが，顕微鏡下における肉眼では，その染色度合いは,両群間に差はなかった．次いで,NADPHジアホラーゼ活性，NOS活性は，遊離細胞において，工タノール群の方が対照群より有意に高い活性を示した．培養細胞において，NADPHジアホラーゼ活性は，培養4日目から工タノール群の方が対照群より有意に高い活性を示し，一方，NOS活性は，培養2日目から工タノール群の方が対照群より有意に高い活性を示した．以上，慢性エタノールによる，NADPHジアホラーゼおよびNOSの活性化および誘導により放出されるNOが，神経細胞障害に関与していることが推察された．