FITC結合抗体を用いた免疫電気泳動法によるタバコモザイクウイルスの定量

抄録

免疫電気泳動法を用いタバコモザイクウイルス(TMV)の微量定量のための簡便法を検討した。抗TMV抗体にはFITCを結合させ泳動後その螢光からTMVの検出・定量を試みた。FITC結合抗体(FA)と,同力価の無結合抗体(NA)を使用し泳動に対する影響を調べた。泳動後FAは紫外線下で,NAはAmido Black染色で,それぞれ検出し泳動距離を測定したところ,両者とも各種濃度のTMVに対して同様の泳動結果を得た。FAもAmido Blackに対して染色されたが低濃度のTMVではFAを紫外線下で測定した場合にのみ検出可能であった。FAを使用して検出しうるTMVの最低限界は0.008μgで,定量は0.05μgのTMVまで可能であった。また,本実験では0.4% FAを使用した場合,濃度範囲の最も広いTMVの泳動を可能にすることから,多数の試料中の未知濃度のTMVを予備定量するのに適していることが明らかになった。種々の濃度のTMVに対して最適なFA濃度を求めたところ,それぞれの濃度のFAで直線関係が得られ,また,たがいに平行関係を示した。本法をトマト葉中のTMVの定量に適用した結果,0.05g生重(直径2∼3cmのトマト葉leaf discに相当)からでも再現性の高い結果が得られた。