黒緑豆カルボキシペプチダーゼの精製とその諸性質

抄録

6日間暗所発芽させた黒緑豆種子よりCPaseを精製し, その酵素化学的性質を検討した。
1) 粗酵素液を硫安分画 (30～70%), Sephadex G-150ゲルろ過, DEAE-Sepharoseクロマトグラフィー, SephadexG-150再ゲルろ過, DBAE-Sepharose再クロマトグラフィーおよびTOYOPEARL HW-50Fゲルろ過を行なうことにより, ディスク電気泳動的に均一なCP-ase標品を単離した。収率は7.8%であり比活性の上昇率は110倍であった。ゲルろ過法による分子量は約7万と推定された。
2) 精製CPaseのZ-Phe-Ala水解時における至適pHは6.0, 至適温度は50℃であった。室温2時間放置時の安定pH領域は5～8であり, 10分間熱処理時の耐熱性は50℃までに認められた。Ag⁺, Hg⁺⁺, Cu⁺⁺などの重金属類およびDFP, PCMBによって阻害された。しかしEDTA, モノヨード酢酸, 2-MEによっては影響されず, 本CPaseがセリン酵素であると示唆された。
3) 本CPaseはpH 6.0でZ-Phe-Alaを最もよく水解し, この基質に対するKm値は1mMであった。