組織培養研究
Online ISSN : 1881-3704
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36 巻 , 2 号
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原著論文
  • 諫田 泰成, 中村 和昭, 山崎 大樹, 片岡 健, 青井 貴之, 中川 誠人, 藤井 万紀子, 阿久津 英憲, 末盛 博文, 浅香 勲, ...
    原稿種別: 原著論文
    2017 年 36 巻 2 号 p. 13-19
    発行日: 2017年
    公開日: 2017/05/24
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    近年、細胞培養に関連する技術の急速な開発に伴い、創薬研究、再生医療への応用など、細胞培養が貢献する分野が拡大している。欧米では細胞培養の再現性、信頼性、的確性を確保するうえで、細胞培養の基本概念を研究者・実験者間で共有することの重大性が認識され、Good Cell Culture Practice(GCCP)を作成することにより、細胞培養技術を一定の水準に維持する努力がなされている。我が国の研究者・実験者においても、細胞培養における基本概念を共有すべきと考え、「細胞培養における基本原則」案を作成した。本基本原則案は、培養細胞の脆弱性、入手先の信頼性と使用方法の妥当性、汚染防止、適切な管理と記録、作業者の安全と環境への配慮、の5条項から構成されている。この基本原則の概念が細胞培養を行うすべての研究者・実験者により共有され、日本の細胞培養技術が上進し、細胞培養技術を用いた研究の信頼性が向上することを期待する。

  • Yoshitsugu OHNUKI, Takumi KONDO, Hiroshi KUROSAWA
    原稿種別: ORIGINAL ARTICLE
    2017 年 36 巻 2 号 p. 21-29
    発行日: 2017年
    公開日: 2017/05/24
    ジャーナル フリー HTML

    Rho-associated protein kinase (ROCK) inhibitor, Y-27632, is an indispensable chemical molecule to maintain the viability of single-dissociated human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) and to form cell aggregates in floating cultures. In this study, we investigated the effect of Y-27632 on the cardiac differentiation of the cell aggregates of hiPS cell line, 201B7. When Y-27632 was not added to the floating culture, the dissociated hiPSCs died and no cell aggregates were formed. The presence of greater than 10 μM Y-27632 was required to form spherical cell aggregates from the dissociated hiPSCs. However, Y-27632 used in the floating culture of the dissociated hiPSCs to form cell aggregates exhibited an inhibitory effect on cardiac differentiation in the adherent culture of cell aggregates. When 30 μM Y-27632 was added to the floating cultures, the extensibility of outgrowth from the cell aggregates was relatively lowered, and the initial time of contraction (the generation of beating cardiomyocytes) was markedly delayed in the adherent cultures. Moreover, the expression levels of the early cardiac differentiation-related genes of NKX2.5 and TNNT2 were decreased with increasing Y-27632 concentration. These results indicate that Y-27632 applied to the floating cultures for cell aggregate formation adversely affected the early cardiac differentiation in the following adherent cultures, although there was no influence on the final cardiac differentiation levels.

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