生物物理化学
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42 巻, 1 号
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  • DNAラダー検出法とアポトーシス関連小分子蛋白検出法
    中村 和行, 藤本 正憲, 長坂 祐二, 田中 経彦
    1998 年 42 巻 1 号 p. 1-11
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    Molecular mechanisms, which were involved in apoptosis of human T lymphoma cell line, JURKAT cells induced by heat-shock stress were studied by techniques of electrophoresis, agarose gel electrophoresis used for separation of DNA fragments in apoptotic cells, two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis for separation of intracellular small proteins such as stathmin and pp 19, and western blotting for microsequencing of the proteins. In this experimental protocol we describe the procedures for the techniques and discuss the points for success in the experiments.
  • 島崎 洋次, 真鍋 敬
    1998 年 42 巻 1 号 p. 13-18
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    A comparative study of vertebrate plasma proteins was performed by two-dimensional electrophoresis (2-D PAGE) without denaturing agents in order to obtain a perspective of the variation of plasma protein composition in different vertebrates. Plasma from raccoon, chicken, turtle, newt, goldfish and human was subjected to the analysis. The 2-D PAGE patterns offered information on vertebrate plasma proteins in their physiological conditions: their isoelectric point (pI), approximate molecular weight (M. W.) and quantity. Each vertebrate plasma protein showed a characteristic protein distribution, reflecting the evolutionary changes in DNA sequence and the expression of plasma protein. On the other hand, for some plasma proteins, the structural relationships between human and other vertebrates were suggested immunochemically. A series of spots detected at pI 6.2-8.3, M. W. 850-kDa, observed in the 2-D PAGE patterns of raccoon, chicken and turtle plasma was immunochemically stained by antihuman immunoglobulin M antibody. And, a series of spots detected at pI 4.8-5.5, M. W. 500-kDa in the patterns of raccoon, chicken and newt plasma was immunochemically stained by anti-human α2-macroglobulin antibody. These results indicate that a perspective of the variation of plasma protein composition in different vertebrates may be obtained by 2-D PAGE without denaturing agents.
  • 尿中安定性, 総IgG値との関連から
    山岸 安子, 伊藤 喜久
    1998 年 42 巻 1 号 p. 19-25
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    ウエスタンブロッティングを使いて, 異なるpHおよび温度条件の下で, 4日間保存し, 尿中IgGの構造解析を行った. 健常者および患者尿における尿中IgGは保存条件にかかわらず一般に安定であった. IgGは4日間で, わずかなフラグメントやFcγフラグメントが出現し, 構造上の変化が認められたが, 完全分子のIgGがほとんどを占めた. IgGおよび, わずかであるがIgGフラグメント, とくにFcγフラグメントは健常者および慢性腎不全の患者の血清中に認められ, 尿中のフラグメントは血清および尿中の両方から由来していることが示された. 完全分子のIgGと同じようにわずかなIgGフラグメントが検出されたときですら, ラテックス凝集免疫比濁法で測定された尿中IgGは一定の値であったが, 完全分子IgGおよびフラグメントも含めて測定していることが示された. IgGはおおむね尿中で安定であり, 糸球体腎症のマーカーとして臨床的利用が可能であると判断された.
  • 中村 和行, 原 伸一, 田中 経彦, 星井 嘉信, 山田 通夫, 石原 得博, 長坂 祐二
    1998 年 42 巻 1 号 p. 27-34
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    新鮮なヒト血漿超低密度リポ蛋白 (VLDL) を鉄イオン触媒活性酸素生成系と反応させると, 脂質過酸化物の生成に伴いVLDL中のアポリ蛋白E3 (apoE3) がヘパリン結合活性を失い白濁し, ついには難溶性の沈殿を形成した. この一連の反応では, 生成された脂質過酸化物4-hydroxy 2-nonenal (HNE) がapoE3分子上のリジン残基等と反応して蛍光をもつ複合物を形成し, apoE3が分子間架橋することが強く示唆された. この結果から, 活性酸素によりVLDLが酸化修飾されてヘパリン結合能を失い, 難溶性の沈殿を形成することによって脂質過酸化物が血管や神経組織に蓄積し, 細胞を傷害することが予想される. アルツハイマー氏病患者の海馬組織を抗HNE抗体で免疫組織染色すると神経原線維変化や脳血管壁のコラーゲン線維が濃染された. 一方, このVLDLの酸化修飾はヘパリンやヒアルロン酸を添加することで強く阻害されることから, これらのグリコサミノグリカンがapoEを含むVLDLやHDLの酸化修飾に対する内因性の抗酸化物質として重要な機能を果たすと考えられる.
  • 八木 美智子, 山口 虎雄
    1998 年 42 巻 1 号 p. 35-47
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    We investigated the increase in body mass and growth of tumors in rat exposed to negative and positive corona discharges (e-- and e+-ions) and high voltage electric fields (HVE) to determine any influence on body mass and tumor growth of electric fields, voltage, currents and electro magnetic fields. Tumor growth was evaluated by histological findings and analysis of the logistic curves (growth curve) determining the stabilized initial size of tumors (10cm3) corresponding to the synchronization of cultured cells. The histology of benzo (a) pyrene (BP)-stimulated tumor cells showed fibrosarcoma cells with abundant progressive pleomorphism and atypical cells in the control rats, and fibroblastic tumor cells with histiocytic and apoptotic cells with loss of pleomorphic and atypical cells in both e--ion and e+-ion and HVE groups. The logistic curves (growth curve) of tumor growth were represented by Hill's components, and reflected histological features. The tumor growth curve has two or three inflection points (x'') on the growth curve. Exposure of rats to both negative and positive corona discharges delayed tumor growth. While, body mass and tumor were activated by negative corona discharge (e--ion) and they grew 1.5 to 1.7-fold (body mass) and 1.2-fold (tumor) greater than in the respective control groups, finally. The effects of e--ion on growth may be via an induced chronic depolarizing response. Tumors in the e--ion group were cylindrical, extending toward the head, and these animals showed internal hemorrhaging after long term exposure. Rats exposed to the positive corona discharge (e+-ion) showed decreased body and tumor growth and survival. The circular tumors in the e+-ion group contained fibroblastic cells and a few apoptotic cells. These effects of e+-ion were thought to be due to a chronic hyperpolarizing response. Tumor growth under high voltage (HVE) showed a positive cooperative response (burst type cooperativity), which triggered at an early stage of tumor growth, and all internal organs merged mutually due to oppression by HVE. Therefore, the effects of electric fields, currents and high voltages, appear to be a stimulation of growth in the short term, but over the long term serious effects on health were seen.
  • 津村 真由美, 上野 芳人, 桑田 昇治, 木野 内喬, 尾野 精一
    1998 年 42 巻 1 号 p. 49-55
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    筋萎縮性側索硬化症(ALS)は上位および下位運動ニューロンの変性を示す原因不明の進行性の予後不良の疾患である. ALSは中年以降に発症し, 初期症状として四肢麻痺, 歩行障害, 構昔障害, 嚥下困難などが挙げられ, 平均生存期間は3年である. ALSの特徴的所見の一つとして, 患者の皮膚がなめし皮のようにしなやかになり, 死に至るまで, 褥瘡が起こりにくいという事実が挙げられる. そこでわれわれは, ALS患者の皮膚を採取しIII型とI型コラーゲンの比を測定した. 方法は患者の皮膚を採取しペプシン消化を行いIII型とI型コラーゲンを分離し, 次にSDS-PAGEによりIII型とI型コラーゲンのバンドを検出し, デンシトメーターで解析しその比を求めた. この結果, ALSでは対照群と比較してIII型コラーゲンが有意に増加しており(p<0.05), III型コラーゲンの増加とALSの罹病期間との間には有意の正の相関がみられた(r=0.96, p<0.02). 本研究の結果はALS患者の皮膚ではALSの経過とともに皮膚のIII型コラーゲンが増加していくという従来の病理学的な研究と合致しており, 今後のALS研究の方向に重要な指標を与えるものと思われる.
  • 赤野 香子, 戸沢 辰雄
    1998 年 42 巻 1 号 p. 57-60
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    We found the fluorescent band revealed to cathodal position than mitochondria creatine kinase (CK) using the method of fluorescent staining (TAITAN N-CK, Helena) on CK electrophoresis, when we examined the serum of a patient with aplastic anemia who have been in serious liver damage (because of appearing graft versus host disease after bone marrow transplantation). However, it is widely noted that the alcohol dehydrogenase (ADH) band is believed to more cathodal position than lactate dehydrogenase (LDH) 5 on LDH electrophoresis. In this study, the fluorescent band revealed to cathodal position than mitochondria CK was also shown without substrate and addition of ethanol enhanced fluorescent strength. From these observations, these results suggest that this abnormal CK band will be ADH.
  • 鈴木 光行, 岡崎 登志夫, 浅原 勝, 上遠野 延行, 菅野 剛史
    1998 年 42 巻 1 号 p. 61-64
    発行日: 1998/02/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    We observed that ALP activity in the serum of patients with eosinophilic pneumonia was supressed by enzyme-linked immunoglobulins to become lower (30IU/l). In this example, weak ALP bands occurred at each of the positions α1, α2β, and β on electrophoretic mobility. We demonstrated that IgG-λ type immunoglobulins combined only with liver type ALP to inhibit ALP activity.
  • 1998 年 42 巻 1 号 p. 66
    発行日: 1998年
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
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