生物物理化学
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44 巻, 2 号
選択された号の論文の17件中1~17を表示しています
  • 廣中 平祐
    2000 年 44 巻 2 号 p. 53-57
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
  • 河合 忠
    2000 年 44 巻 2 号 p. 59-65
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    The Society of Electrophoresis was founded in 1950 by a group of the researchers in Japan who were engaged with the Tiselius Electrophoresis, and the name of the Society was changed to The Japanese Electrophoresis Society in 1993. The main activities of the Society include biannual scientific meetings (the General Meeting and the Spring Meeting), publications of the Physico-Chemical Biology (renamed to the Japanese Journal of Electrophoresis since 1995) and the monographs on Electrophoretic Methods, proposal of the standard electrophoretic methods (Tiselius, filter paper and cellulose acetate electrophoresis, and the standard films for densitometry), annual training courses of electrophoresis for beginners since 1963, and presentation of two types of academic awards (the Kodama Prize and the Hirai International Prize).
  • 島尾 和男
    2000 年 44 巻 2 号 p. 67-72
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    During fifty years' history of the Japanese Electrophoresis Society, many types of handmade electrophoresis experiments by many members of the Society contributed to the progress of electrophoretic methods. Starting from the handmade Tiselius' electrophoresis apparatus by Hirai and Shimao, recollections of the members active in the handmade electrophoreses in the first fifteen years of the Society are described. Then, two examples of handmade electrophoresis by the author, namely, a buffer gradient gel electrophoresis and a comparative study of computer simulations of glycine and tricine discontinuous sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis made in the last twenty years are shown.
  • 佐藤 記一, 渡慶 次学, 木村 博子, 北森 武彦
    2000 年 44 巻 2 号 p. 73-77
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    イムノアッセイシステムをガラスマイクロチップ内に集積化した. チップの微細流路内に導入したポリスチレンビーズ表面に分泌型免疫グロブリンAを吸着させ, 金コロイド標識した抗体を反応させた後, 生じた複合体量を熱レンズ顕微鏡で測定した. 集積化により反応が従来法の90分の1の時間で終了したため, 合計の分析時間が24時間から45分程度へと短縮できた. 微小空間のスケールメリットによって反応が効率よく起こり, 時間の短縮につながったものと思われる. さらに従来法で必要であった煩雑な操作が簡便な操作に置き換えられ, 操作性も向上した. 作製した集積化イムノアッセイシステムは医療診断や生化学研究において有効な分析手法であると思われる.
  • 神原 秀記
    2000 年 44 巻 2 号 p. 79-83
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    One of the key issues in Human Genome project was to develop a high throughput DNA sequencer that should have one order of magnitude higher throughput in base reading than the conventional DNA sequencer. Various technologies have been developed along this direction including DNA chips and capillary array DNA sequencers. By the use of replaceable gel as well as a highly sensitive fluorescence detector, a very high throughput DNA sequencer has been achieved and commercialized with capillary array gel electrophoresis. Now it is expected that the human genome sequencing is completed in a few years. The function analysis of genes and their application to medical and pharmaceutical fields are the next research target where an ultra-high speed and throughput analyzer, from the view point of analyzable sample numbers, is required. The required analyses are gene expression profiling, comparative genome analysis including SNPs (single nucleotide polymorphisms) analysis. A capillary array gel electrophoresis with short capillaries, micro-fabricated multi-channel electro-devices, or DNA chips will take the major role in the post genome era. Besides, the development of sample preparation devises for various applications are getting important.
  • 馬場 嘉信
    2000 年 44 巻 2 号 p. 85-89
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    半導体集積化技術に基づく微細加工によって作製したマイクロチップおよびナノチップ技術をDNA解析に応用した. 特に, マイクロチャンネル中のDNA分子ならびにDNAサンプルのバンドをイメージングする技術を開発し, マイクロチャンネル中のDNA分子の挙動を詳細に検討し, DNA解析の条件を最適化した. さらに, これらの情報をもとに, ゲノム解析を高速化するためのマイクロチップの設計を行った. また, 1分子ゲノムDNA解析のためのDNA分子マニピュレーション法を新たに開発した.
  • 中山 洋
    2000 年 44 巻 2 号 p. 91-95
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    A capillary column liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) system for the analysis of proteome (the protein complement expressed by a genome, a cell or a tissue type) is described. The system has a power to determine accurate molecular mass, amino acid sequence and post-translational modification of micro-quantity of protein. The system further integrated with surface plasmon resonance based biosensor (BIA) to obtain sequence information of the affinity-bound proteins on the BIA sensorchip. Because BIA provides quantitative molecular interaction information and because LC-MS/MS provides structural information with femtomole amount of samples, the integrated system of BIA and LC-MS described here should allow wide application to molecular studies of stable and unstable interaction.
  • 中西 豊文
    2000 年 44 巻 2 号 p. 97-101
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    The electrospray ionization mass spectrometry (ESIMS) is a powerful tool to detect and characterize abnormal proteins and to determine the ratio of mutant and wild proteins and peptides. Using this technique, the ions of intact normal and variant proteins were clearly observed in samples from patients with hemoglobinopathies and neurodegenerative diseases such as familial amyloidotic polyneuropathy (FAP) and amyotrophic lateral screlosis (FALS). We detected 23 kinds (43 cases) of abnormal hemoglobins (Hbs), 10 kinds (38 cases) of transthyretins (TTRs) mutants and 4 kinds of Cu/Zn superoxide dismutases (SOD-1s) for past 6 years. We also measured glycated β-globin N-terminus hexapeptide (HbA1c) by Poroszyme V8 protease digestion/LC-ESIMS and proposed a calculation “weights sum method” for the quantification of true HbA1c values.
  • 谷 憲三朗
    2000 年 44 巻 2 号 p. 103-107
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    遺伝子治療臨床研究は米国を中心に進められてきているが, まだこれらの臨床研究のほとんどが第I/II相臨床研究であり, 安全性の検討を中心に進められている. これらの研究の中でも, 免疫遺伝子治療は全身的効果が期待でき, 従来からの免疫療法の流れをさらに発展できる可能性があるものとして注目されている. われわれは, 特に専門的抗原提示細胞である樹状細胞活性化能の高いGM-CSF (顆粒球マクロファージコロニー刺激因子) 遺伝子を用いた免疫遺伝子治療臨床研究を転移性腎癌患者を対象に行ってきている. 本稿では, その現状をご紹介させていただく.
  • 中田 恵輔, 中尾 一彦, 江口 勝美
    2000 年 44 巻 2 号 p. 109-113
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    The α-fetoprotein (AFP) gene is reexpressed in hepatoma cells. We have previously shown that the retrovirus vector (LNAF0.3TK) carrying the herpes simplex virus thymidine kinase (HSVTK) gene regulated by the 0.3-kb human AFP promoter provides ganciclovir (GCV)-mediated cytotoxicity in AFP-producing hepatoma cells in parallel with the ability of AFP production. Since the recent reports have revealed that a G to A substitution in the human AFP promoter region is relevant to the hereditary persistence of human AFP, the same substitution was generated in LNAF0.3TK to construct LNAFM0.3TK. LNAFM0.3TK infection into intermediate and low AFP-producing human hepatoma cells, PLC/PRF/5 and huH1/cl. 2, respectively, resulted in more pronounced growth inhibition by GCV treatment than LNAF0.3TK infection. In addition, to improve the efficacy of retrovirus-mediated gene therapy for the intermediate or low AFP-producing hepatoma cells, human AFP domain B enhancer region was linked to 5'-end of the 0.3-kb AFP promoter region. The infections with sense and reverse-oriented retrovirus vectors, LNAFE0.3TK and LN (AFE0.3TK) R, respectively, sensitized PLC/PRF/5 and huH1/cl.2 cells to GCV, in which LN (AFE0.3TK) R infection showed more pronounced tumoricidal effect. These results suggest that modifications of the AFP promoter ensure the therapeutic gene expression in gene therapy for the low AFP-producing hepatoma cells.
  • 伊東 文生, 今井 浩三
    2000 年 44 巻 2 号 p. 115-117
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    マトリックスメタロプロテアーゼのファミリーであるマトリライシンは, 発現が癌細胞にみられることが特徴で, 癌の浸潤・転移に直接的に関与していることが示唆されてきた. 食道癌・胃癌・大腸癌・膵癌・肝細胞癌など, ほとんど全ての消化器癌においてその発現を認めており, いずれの癌種類においても60~70%の症例に発現を認め, 特に浸潤先進部での発現が特徴的である. 我々は, 癌浸潤先進部におけるマトリライシンの発現が食道癌・大腸癌において患者予後を決定する重要な因子であることを見出し, 報告してきた. また, マトリライシン遺伝子の導入実験により, マトリライシンが大腸癌細胞の浸潤能・転移能を増強しうることも明らかにしている. 大腸癌細胞における発現をATRAで抑制したところ, 癌細胞の基底膜浸潤能が有意に抑制されることが明らかになった. ATRAおよびアンチセンスマトリライシンの応用により臨床応用が可能であることが考えられた.
  • 松本 邦夫, 中村 敏一
    2000 年 44 巻 2 号 p. 119-124
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    Hepatocyte growth factor (HGF) exhibits mitogenic, motogenic, morphogenic, and anti-apoptotic activities, through Met/HGF receptor. In a variety of tumor tissues, HGF is involved in malignant behavior of cancers as a mediator in tumor-stromal interaction, enhancing tumor invasion and metastasis. To establish a new strategy to inhibit tumor invasion and metastasis, we prepared an antagonistic molecule for HGF. The antagonist, NK4, is an internal fragment of HGF that encompasses the N-terminal hairpin and four kringle domains. Notably, NK4 inhibits tumor angiogenesis, growth and metastasis, as an angiogenesis inhibitor, as well as HGF-antagonist. In vitro, NK4 specifically inhibited tumor invasion induced by HGF. In contrast, NK4 inhibited growth and migration of microvascular endothelial cells induced by basic fibroblast growth factor (bFGF), vascular endothelial cell growth factor (VEGF), and HGF. NK4 inhibited bFGF-induced angiogenesis in rabbit cornea. We concluded that NK4 is bifunctional: it is HGF-antagonist and angiogenesis inhibitor. When the anti-tumor activity of NK4 was examined in murine metastatic tumors, Lewis lung carcinoma, administration of NK4 suppressed the growth of primary tumors subcutaneously implanted in mice, and decreased the number of metastatic nodules in the lung. NK4 suppressed neovascularization of tumor cells. Likewise, NK4 inhibited invasion, tumor angiogenesis, peritoneal dissemination, and liver metastasis of pancreatic cancer. The bifunctional properties of NK4 to act as an angiogenesis inhibitor and as a HGF antagonist raises possibility that NK4 may prove a therapeutic for cancer patients.
  • 東山 繁樹, 石黒 啓司, 永津 俊治, 谷口 直之
    2000 年 44 巻 2 号 p. 125-130
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    ラット褐色細胞腫 (PC12細胞) からRT-PCR法を用いてErbB新規リガンドとそのアイソフォーム4種類を同定し, 成熟ラットの脳と胸腺で強く発現していることから neural- and thymus-derived activator for ErbB kinases (NTAK) と命名した. 予想される蛋白質構造は免疫グロブリン (Ig) 様ドメイン, EGF様ドメイン, 疎水性ドメインからなりEGFファミリーのメンバーである neuregulin-1 (NRG-1) と同様のドメイン構造を示した. 哺乳動物細胞発現系を用いてこの蛋白質を精製したところ46kDaの糖蛋白質で, ヒト乳癌細胞株MDA-MB-453細胞を分化させた. NTAKはホモダイマーのErbB3, ErbB4には結合するがErbB1とErbB2には結合しなかった. しかし, これらのレセプターをヘテロダイマーで細胞表面上に発現させると, 構成する全てのレセプターでチロシンのリン酸化が観察された. このことは, NTAKが結合すると異なるErbBファミリーが二量体を形成し, 活性化してクロストークすることを示唆している. よって, NTAKは新しいEGFファミリーのメンバーでNRG-1様の機能を持っていることが明らかになった.
  • 坂井 田功, 中村 和行, 沖田 極
    2000 年 44 巻 2 号 p. 131-134
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    Isolated stellate cell on plastic dish indicated the proliferation and the expression of procollagen type I mRNA during 14 days culture. Thus culture system of stellate cell in vitro may reflect pathophysiology in vivo. A choline deficient L-amino acid defined (CDAA) diet led to the development of liver cirrhosis in 100% of male Wistar rats after 16 weeks and developed hepatocellular carcinoma in 90% of rats after one year. Concurrent administration of a prolyl 4-hydroxylase inhibitor, 2, 4-pyridine dicarboxylic acid bis [(2-methoxyethyl amide)] (HOE 077), to rats fed a CDAA diet reduced the increase in liver hydroxyproline content in a dose-dependent manner for doses up to 200ppm in parallel with the percent area of GSTP-positive lesions. Also 200ppm HOE 077 reduced the incidence of development of hepatocellular carcinoma from 90% to 50% one year after a CDAA diet administration. These data suggest that inhibition of fibrosis may limit the development of subsequent neoplasms in the liver.
  • 松下 誠, 入野 勤, 菰田 二一
    2000 年 44 巻 2 号 p. 135-138
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    我々はポリアクリルアミドゲル電気泳動法でみられる分泌型の血液型に依存して血中に出現する高分子小腸型アルカリ性ホスファターゼ (HIAP) と, 従来から報告されているアガロースゲル電気泳動法でみられる小腸型バリアント (IAPバリアント) の関連性について検討を行った. 53例の健常者を対象に上記の両電気泳動を実施したところ, HIAPのみられるヒトのみにIAPバリアントが検出され, その量が多いヒトはBまたはOで分泌型であった. さらにHIAPおよびIAPバリアントの両アイソフォームは絶食時と脂肪食後でその量がほとんど変動せず, またスブチリシンおよびパパイン処理することにより通常のIAPに変換することが可能であり, 両アイソフォームの性状は完全に一致するものであった. これらの結果より, 我々はHIAPとIAPバリアントが同一のアイソフォームであるものと結論づけた.
  • 中塚 ももえ, 相根 義昌, 孝口 裕一, 渡部 俊弘, 大山 徹
    2000 年 44 巻 2 号 p. 139-143
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    We purified purple acid phosphatase (PAPase) from kidney bean (Phaseolus vulgaris L. Ohfuku) seeds, a Japanese cultivar of the kidney bean. The molecular mass of the purified native enzyme was estimated approximately 110kDa by gel filtration. Following SDS-PAGE in the presence of 2-mercaptoethanol, glycosylated polypeptides of major 61kDa and minor 59kDa were observed. The N-terminal amino acid sequences for both bands were determined to be GKSSNFVRKTNKNRDMPLDS, suggesting they were two different subunits with the same N-terminal but probably different C-terminal or degree of glycosylation. The partial nucleotide sequences covering the N-terminal region were also determined using polymerase chain reaction (PCR). Comparison with the deduced amino acid sequence from the nucleotide sequence and that of the purified enzyme revealed that the N-terminal amino acid residue corresponded to Gly 23 from the initiation colon (Met). For the deduced amino acid sequence of the PAPase gene, a SignalP (ver. 2.0) analysis program predicted that a 22 amino acid sequence at the N-terminus of a precursor protein was signal peptide. This prediction was in agreement with the fact that PAPase with a signal peptide at the N-terminus was cleaved between Gly 22 and Gly 23 by putative signal peptidase.
  • 星野 忠, 松本 央, 黒川 千恵, 阿部 和美, 中村 利弘, 熊坂 一成, 河野 均也, 菰田 二一
    2000 年 44 巻 2 号 p. 145-148
    発行日: 2000/06/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    Three types of the hereditary variant human amylase (AMY) of pancreatic (P) origin are known, dominant P2, dominant P2S, and slow P. A 67-year-old woman visited our clinic with chief complaints of epigastralgia and back pain, and she had hyperamylasemia during laboratory tests. Then, we found an extra band which migrated between P1 and dominant P2S by AMY isoenzyme analysis with cellulose acetate membrane electrophoresis of the patient's serum. The extra band did not react with the anti-human salivary-type AMY inhibitory monoclonal antibody, suggesting that the extra band seemed to be derived from P-type AMY, a novel P-type AMY variant. When the pedigree of this patient was investigated, the same P-type AMY variant could be detected in 7 of 14 family members, and we also found to be the novel band in both males and females of this family. Therefore, the type of inheritance of the AMY variant was considered to be autosomal dominant. The appearance rate of this novel P-type AMY variant should be investigated in future.
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