昭和34年に当教室より凍結保存精子によるAID児の出産例を報告して以来すでに8年になるが、現在迄に凍結保存精子による妊娠例は71例に達している。これら妊娠例中における精子保存の日数は、大部分が60日以内であるが、93日、139日、167日、315日、393日等の長期保存による妊娠例もあり、これら長期保存精子の蘇生率は50〜70%であつた。これら凍結保存精子によるAID児の分娩確認例は46例であり、性比は男対女は76.9対100、又初体重は男児平均は3065g、女児平均3229gであつた。今回、我々は以上の凍結保存精子によるものも含めたAID児54例の知的身体発育について、自動心理学専攻の山口氏と共同で調査した。調査方法は、満2才6カ月以上のものについては田中Binet個人テスト法によりI.Q.を求め、満2才6カ月未満のものについては津毛稲毛等による乳幼児精神発達診断法によりD.Qを求めた。又以上の調査に加えて母の学歴及びその夫の学歴も調査した。

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大腸菌を用いての凍結融解実験で、-25℃の緩慢凍結で細胞は収縮するが、融解後の生残率は高く、膜機能障害も少ない。-150℃急速凍結では細胞内氷晶形成がみられ、融解後の生残率は低く、膜機能障害も大きい。このことから、大腸菌細胞の凍結障害の主因をなすものは、細胞内氷晶形成であろうと考えられた。

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凍結過程における細胞内氷晶形成の機構を知るために、大腸菌の好気及び嫌気培養菌を用いて、凍結の際の細胞水分の移動に注目して、細胞内に氷晶ができることの条件を検討した。その結果、嫌気培養菌は好気培養菌より凍結による障害を受け易いとともに凍結以外の方法での急速な細胞水分の移動によつて死滅しやすいことが認められた。また、予め細胞水分を脱水しておくと、脱水の度合が大きいほど脱水しない場合に比べて生残率の低下が抑制されるとともに細胞内氷晶形成が防がれる。しかも、この抑制のためには、好気培養菌より嫌気培養菌の方がより高度に脱水して、残つている細胞水分量を少なくしなければならない。以上の実験事実から、嫌気培養菌の細胞膜の方が水に対する透過性が小さいことが認められ、細胞内氷晶形成は細胞水分の脱水速度と細胞膜の水に対する透過性との兼ね合で決ることが確認された。

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私どもは先に、百日せきワクチンの力価試験に用いるマウス系統の比較を行い、ddN-JCLが最も信頼性が高く、CF1-JCLがこれに次ぎ、ICR-JCLは百日せき菌感受性が低く、またdd系の一市販マウスは逆に感受性は高いが、実験差が大きくて不適当であることをのべた。一方百日せきワクチンの新鮮なものは毒性が強くて一般の使用には適さないため、種々の解毒処理を必要とする。毒性低下のための処理はPittman等がすでに報告しているが、処理がワクチンの力価に及ぼす影響は明示されていない。そこでわれわれは数種の処理を施したワクチンを凍結真空乾燥して保有し、ddN由来の市販マウスを使用して、繰返して力価試験を行つた。液状ワクチンは保存中に次第に力価の低下を来し易いが、乾燥品を用いることによつて、かなり推計学的に信頼度の高い成績をうることができたので、ここに報告したい。

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さきに乾燥過程ないしは乾燥状態での保存過程における工業酵素の安定性を、結晶酵素を種々の添加物とともに凍結乾燥し、その直後または温度をかえて一定時間放置後の活性を測定する方法で検討した。その結果α-アミラーゼ、糖化型アミラーゼ、セルラーゼなどの失活は、主としてアミノカルボニル(Ac)反応に基づくものであることを報告した。今回は種々のカルボニル(c)化合物(主として糖類)を用いてAC反応によつて出来る種々の酵素誘導体の性状について、とくに活性基を保護してAC反応させる方法で酵素活性の低下を最少限におさえて性状の異なる酵素誘導体をうる方法について検討した結果を報告する。

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近年,凍結乾燥法による微生物の長期間保存に関して多くのレポートが提出されている。我々は,分類学的にも,また有用菌としても広く知られているAspergillus属の5種の菌株を用いて,凍結乾燥の処理方法,分散媒の保存効果への影響,処理後のrecultirationの場での酵素活性につき検討した結果について報告する。

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先に,我々は同一ロツトの乾燥痘留を用い, Abderhalden法による含水度測定の基礎的を問題を調べ,その成績は第11回本研究会に報告した。今回はAbderhalden法による経皮用乾燥BCGワクチンの含水度測定値の有意差検定を容易にする目的で, 3通りの乾燥条件によつて,含水度の異なる3段階のワクチンを作り,それらの反復測定値の分散分析を行い,測定値間の有意差検定について検討したので,その成績を報告した。

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我々は第12回本研究会において,含水度精密測定装置を開発し, (1)装置の原理と構造, (2)乾燥BCGワクチンの測定例, (3)含水度精密測定装置による含水度値とAbderhalden法による含水度値との関係, (4)装置の活用例を報告した。しかしながら,本装置とAbderhalden法による含水度値との関係は含水度値(本装置) 0.14〜1.88%の範囲の23例について追及されたに過ぎなかつた。この含水値のものは非常に限られた範囲のもので,実際上の測定の対象からみれば,資料の不足が感じられる。今回は1.98〜4.52%の範囲のもの34例の成績を追加して,総計57例の測定成績から両法による含水度値との関係を再検討すると共に,本装置による測定値間の有意差検定についても検討を加えたので,その成績を報告した。

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