GnRHの測定に固相法EIAの導入を検討した。
合成GnRHとperoxidaseをbis-diazotizedbenzidineを用いて結合させ,POD標識GnRHを作製した。標識後,SephadexG-25カラムにより精製したところ,単峰性の流出パターンが得られ,このピークの分画をPOD標識GnRH溶液として用いた。一方,,カルボジイミド法によって作製した[Glu
1]-GnRH-RSAを馬に反復投与して作製した抗血清から,硫安塩析法によってγ-globulinを分別し,Sephacryl S-300カラムによってIgGを精製した,このIgGをポリスチレンボールに物理的に吸着させて抗GnRH抗体吸着ポリスチレンボールを作製した。
EIAは競合法によって行なった。酵素反応基質としては
o-phenylenediamine-H
2O
2を用い,反応後分光光度計で492nmの吸光度を測定した。その結果,1~1,000ng/mlの範囲で用量反応曲線が得られ,測定限界はほぼ1ng/mlであった。
本EIA系に対し牛臓器酸性抽出物による抑制反応を行なったところ,下垂体柄抽出物のみ標準曲線と合致した希釈曲線が得られ,他の下垂体前葉•肝臓および横紋筋抽出物では,反応が認められなかった。
これらの結果から,本法によってGnRHのEIAが可能であると考えられた。
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