抄録
In situ hybridization（ISH）法は，組織切片，細胞，染色体に存在する特定の核酸シークエンスの局在を検出する方法であり，本稿では，ジゴキシゲニン標識cRNAプローブを用いた脳凍結切片上でのmRNA検出方法について紹介する．ISH法は，対象となる組織の形態を保持した状態でmRNA発現部位を可視化するため，特に脳などの高度に不均一な組織を扱うときには有利である．最初にISHを行うときは，次に示す事項に注意するとよい：１）適切なプローブのデザイン，２）浮遊法によるハイブリダイゼーション，３）アルカリフォスファターゼ発色系の使用，４）stringencyの条件検討．つまり，感度をよくするために長鎖プローブとアルカリフォスファターゼ発色系を用いた浮遊法ISHを行い，ハイブリダイゼーションの温度条件をコントロールすることで特異的かつ安定したデータが得られる．今回紹介するISH法を基本として，二重染色，動物胚を用いたホールマウントISH，電子顕微鏡への応用なども可能である．
