【目的】CRISPR/Cas9系mRNAを直接受精卵へ注入すると，ホモ KO胚が高率に得られることが報告されている。ブタでもこのような報告は数例あるが，その破壊様式（ホモKOかヘテロ KOかなど）に関してはまだ未解明な部分が多い。今回，受精卵に導入されたCRISPR/Cas9系mRNAのゲノム編集の効果をより早い時期に確認するため，「胚盤胞におけるアッセイ系」を確立し，ゲノム編集による標的遺伝子破壊の結果を組織化学的，分子生物学的側面から検討した。【方法】標的遺伝子として異種移植抗原α-Gal epitopeを合成する酵素α-1,3-galactosyltransferase（α-GalT）を選んだ。α-GalTのKOによるα-Gal epitopeの消失は，α-Gal epitopeを特異的に認識するレクチンIB4染色により確認される。屠場から得たブタ卵巣から卵子を採取し，成熟処理後，単為発生のための卵子活性化処置を施した。この単為発生卵子の細胞質に~2 pLのmRNA混合液（Cas9, gRNA, EGFPに対応するmRNA）を顕微注入した。その後，胚盤胞期まで培養し，胚盤胞個々について解析を行った。【結果・考察】mRNAを注入された107個の内，52個が胚盤胞まで発生し，そのうち26個（50%）が明確な蛍光を示したが，その殆ど（96 %, 25/26）では，EGFP蛍光についてモザイクであった。これら胚を固定し，赤蛍光標識IB4で染色した結果，すべて赤蛍光を示したが，EGFP蛍光を発する箇所では赤蛍光の減弱が認められた。胚盤胞を個々にlysisし，ゲノムDNA精製，全ゲノム増幅を施した後，α-GalT遺伝子におけるmutationの有無を16個の胚についてT7E1 assay, sequencingで検討した。その結果，6個（5個が蛍光，1個が非蛍光）にmutationを認めた。sequencing解析から胚盤胞は，ホモKO，ヘテロKO，野生型細胞などから構成されていることが示された。今回の実験から，CRISPR/Cas9はブタ卵子のゲノム編集にも有効であることが示唆されたが，得られた胚はmutationについてはモザイクであり，それを回避するための改善が今後求められる。
