ヒトアポリポプロテイン(a)発現ミニブタの作出

抄録

動脈硬化症は死亡率第2，3位の心臓，脳血管疾患（心筋梗塞や脳梗塞）の原因となる疾患である。したがって，その治療法の開発を行うことは，社会的ニーズも緊急性も高い。新しい治療法をいきなりヒトで試す訳にはいかないので，ヒトに近いモデル動物を使って臨床前試験を行う必要がある。血中の高濃度リポプロテイン(a） [Lp(a)] はヒト動脈硬化症の危険因子である。Lp(a）は低密度リポプロテイン（LDL）にアポリポプロテイン(a) [apo(a)]が結合したもので，apo(a）はヒトを含む霊長類にしかないため，適当な動物モデルがない。今回演者らは体細胞核移植法（SCNT）を用いて，ヒトapo(a）発現ミニブタの作出に成功したので報告する。LDLへのapo(a）の結合は本来の合成部位である肝臓だけでなく，血中でも起こることが報告されていた。そこで，肝臓を含むubiquitousな部位での発現を可能にするCAGプロモーターの下流にインフルエンザウイルスヘマグルチニン（HA）タグを付加したヒトapo(a） cDNAを置き，ミニブタ細胞に導入した。apo(a)発現ベクターにあるneo遺伝子の標的であるG418で選別を行い，独立したコロニーを単離し，HA抗体による免疫医染色によりapo(a)発現細胞を同定した。なお，apo(a)発現細胞は小胞体が染色され，合成されたapo(a）の80%以上が分泌されることなく分解されているとする報告と合致する。また，腎臓由来の上皮細胞では安定発現細胞クローンが得られたが，胎児由来線維芽細胞等では得られなかった。apo(a)発現腎細胞をドナーとしてSCNTを行い，導入したapo(a)遺伝子を持ったミニブタの作出に成功した。この個体（F0）の血中Lp(a)濃度は有意に高く（>400 mg/dL），その仔ブタ（F1）4頭の内，2頭にはその形質が伝わっていた。従って，今回得られたヒトapo(a)トランスジェニックミニブタは，ヒト動脈硬化症発症のモデル動物となる可能性がある。