【目的】二細胞期胚の冷蔵輸送は，簡便かつ安価な遺伝子改変マウスの輸送法として利用されている。しかし，現在のところ，マウス二細胞期胚は，保存期間の延長により発生能が低下し，72時間以上の保存は困難である。細胞や臓器の冷蔵保存において，酸化ストレスによる細胞質中還元型グルタチオン（GSH）量の低下が生じることが知られている。また，初期胚におけるGSH量の低下は，胚の発生能を低下させる原因となることも報告されている。そこで本研究では，冷蔵保存したマウス二細胞期胚の細胞質中GSH量と胚の発生能の関係を検討し，抗酸化剤であるN-アセチル-L-システイン（NAC）が冷蔵胚の細胞質内GSH量および発生能の改善に対する効果を評価した。【方法】C57BL/6Jマウスから採取した卵子および精子を用いて体外受精を行い，二細胞期胚を作製した。二細胞期胚の冷蔵保存は，M2培地あるいはM2培地にNACを添加した保存液中で行った。二細胞期胚の細胞質内GSH量は，チオール選択的蛍光試薬であるViVid Fluor Cell Blue CMACにて細胞質内チオール基を標識後に蛍光顕微鏡下で観察し，蛍光強度を評価した。また，冷蔵した二細胞期胚の発生能は，体外培養および胚移植により評価した。さらに，NACを添加したM2培地を用いて，冷蔵輸送実験（旭川医科大学-熊本大学間）を行い，輸送された胚の発生能を評価した。【結果・考察】二細胞期胚は，M2培地での保存期間の延長に伴って，発生率及び細胞質中GSH量が低下した。一方，NAC含有M2培地は，二細胞期胚の細胞質中GSH量の低下および発生率の低下を抑制した。さらに，NAC含有M2培地で96時間冷蔵保存した二細胞期胚は，胚移植により産子へと発生した。また，本法を用いて冷蔵輸送された二細胞期胚の移植によっても，産子が得られた。以上，本研究により，マウス二細胞期胚の冷蔵保存における細胞質中GSH量の低下が発生能の低下に関与し，NACが二細胞期胚の保存期間の延長に有用であることを明らかにした。
