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閉鎖循環方式で飼育されたヒラメに発生したネオヘテロボツリウム症の治療事例
2025 年 60 巻 3 号 p. 166-169
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2025 年 60 巻 3 号 p. 166-169
水温約18°Cの閉鎖循環方式で飼育されたヒラメParalichthys olivaceusにおいて，単生類Neoheterobothrium hirameの寄生によるネオヘテロボツリウム症が発生した。既存の知見を参考に，塩水浴（食塩 3～8％添加海水・5～60分間浸漬）を複数回実施したが，高い塩濃度では塩水浴後に一部のヒラメが死亡した一方で，低い塩濃度ではN. hirame成体の駆除は困難であり，寄生が再発した。そこで，食塩 8％および 2-フェノキシエタノール 400 mg/Lを添加した海水にヒラメを5分間浸漬するとともに，麻酔後のヒラメの口腔内からN. hirame成体を除去する処理を，処理日数の間隔を変えて複数回実施した。処理間隔を36日間以上とした場合は寄生が再発したものの，22日間とした場合には，処理から約15カ月間後の飼育終了まで，ヒラメおよび飼育装置内からN. hirameは確認されなくなった。
東京電力HDでは，ALPS（多核種除去設備，Advanced Liquid Processing System）処理水の海洋放出に伴う風評を抑制するため，ALPS処理水を添加した海水中でヒラメParalichthys olivaceusなどを飼育する海洋生物飼育試験を実施した（古田ら，2024a）。放射線管理対象区域内でのALPS処理水を添加した飼育試験に先立ち，飼育技術の習得のため管理対象区域外での飼育を行った。管理対象区域内で使用した飼育水の外部への排水が困難であることから，いずれの飼育でも閉鎖循環方式を採用したが，管理対象区域外での飼育開始から約2カ月半後以降に死亡が始まった。死魚の鰓の白化やひん死魚の口腔内に寄生虫が確認されたことから，単生類Neoheterobothrium hirameの寄生によるネオヘテロボツリウム症（良永，2017）が死因と判断された。閉鎖循環方式での魚類飼育では，いったん病原体が飼育装置内に侵入すると対応が困難と一般的に考えられていることから（森田，2017），一時期は飼育試験の成立が危惧されたが，既存知見の活用により寄生の再発を防ぐことができたので，本報ではその治療事例について紹介する。
総水量約 4.5 kLの閉鎖循環式飼育装置1式を放射性管理対象区域外に，同じ仕様の飼育装置4式を管理対象区域内にそれぞれ設置した（古田ら，2024a）。飼育装置一式は，水量約 1 kLの飼育槽4基（タンク①～④），循環ポンプ，硝化槽，プロテインスキマー，紫外線照射装置，脱窒槽などから構成される。2022年3月16日（飼育0日目）に福島県栽培漁業協会より体重約 100 g（未計測）のヒラメ140尾（第1群）を入手し，放射性管理対象区域外の飼育装置のタンク①～④に35尾ずつ分容した。飼育開始から約2カ月半後の2022年5月下旬（飼育70日目以降）からネオヘテロボツリウム症による死亡が始まった。そこで，後述するように食塩添加海水浴による駆虫を試みた。さらに，2022年9月21日（飼育189日目）には，その時点で生残していた第1群のヒラメ78尾（全長 33±3 cm，体重 376±10.8 g；平均±標準偏差）を，タンク③および④に半数ずつ分容するとともに，福島県栽培漁業協会から新たにヒラメ184尾（全長 16±2 cm，体重 36±12 g；第2群）を入手し，タンク①に100尾，タンク②に84尾収容した。また，第2群と同一ロットのヒラメ758尾（第3群，全長体重は第2群と同じ）を，放射性管理対象区域内の飼育装置4基中2基に174尾ずつ，2基に205尾ずつ，それぞれの4タンク間でほぼ同数となるよう収容した。すなわち，第2群のヒラメはネオヘテロボツリウムに感染した第1群のヒラメと同一系統の飼育装置に収容したのに対し，第3群のヒラメは第1群とは別系統の，立ち上げた直後の閉鎖循環方式の飼育装置に収容したこととなる。ヒラメには週3日間～毎日，一週間の給餌量が魚体重の1％程度となるよう，市販の配合飼料（おとひめ，日本配合飼料；珊瑚，ヒガシマル）を給餌し，水温18±1°Cで飼育した。
ヒラメのネオヘテロボツリウム症の治療に関しては，食塩3％添加海水30分間浴で鰓に寄生する仔虫を（Yoshinaga et al., 2000），食塩8％（Isshiki et al., 2003）または7％（西岡，2004）添加海水5分間浴で仔虫と口腔内に寄生する成体を，それぞれ除去できることが報告されている。それらの知見を参考に，2022年6月2日～7月20日（飼育78～126日目）の約50日間に，ヒラメ第1群に食塩（日本海水，食塩（国産塩）；NaCl純度99.0％以上）添加量と処理時間を変えた塩水浴を複数回実施した（表1）。塩水浴後には随時，一部のヒラメを麻酔しての口腔内検査および，プロテインスキマーの処理水に濃縮されるN. hirame卵（古田ら，2024b）を実体顕微鏡検査し，魚体および飼育装置内のN. hirameの有無を確認した。食塩8％添加海水5分間浴および食塩5％添加海水30分間浴では，それぞれ47％および74％のヒラメが塩水浴の24時間後までに死亡したため（表1），飼育106日目以後はヒラメへの影響が小さいと考えられた食塩3％添加海水60分間浴を実施した。また，飼育253日目には，ヒラメ第1群の一部のヒラメの口腔内にN. hirame成体の寄生が確認されたため，追加の塩水浴を行った。
| 塩水浴対象群 | 水槽No. | 飼育*1 日数（日） | 食塩*2 添加量（％） | 処理時間 （分） | 処理尾数 （尾） | 塩水浴後の*3 死亡数（尾） |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 第1群 | ① | 78 | 3 | 60 | 25 | 1 |
| 第1群 | ② | 84 | 8 | 5 | 34 | 16 |
| 第1群 | ③ | 89 | 5 | 10 | 32 | 0 |
| 第1群 | ④ | 98 | 5 | 30 | 27 | 20 |
| 第1群 | ①② | 106 | 3 | 60 | 43 | 0 |
| 第1群 | ③④ | 107 | 3 | 60 | 43 | 0 |
| 第1群 | ①②③④ | 126 | 3 | 60 | 82 | 0 |
| 第1群 | ③④ | 253 | 3 | 60 | 75 | 0 |
| 第2群 | ①② | 189 | 3 | 60 | 184 | 0 |
| 第3群 | *4 | 0 | 3 | 60 | 758 | 0 |
ヒラメ第2群および第3群については，入手時の水槽収容前に予防的措置として食塩3％添加海水60分間浴をそれぞれ行った。前述のとおり第2群は第1群と同じ飼育装置に収容したのに対し，第3群は第1群および第2群とは独立した飼育装置に収容した。
第1群および第2群では，塩水浴の実施にも関わらず飼育321日目にすべてのタンクのヒラメの口腔内にN. hirame成体の寄生が確認された。一方，塩水浴後にネオヘテロボツリウム感染魚と独立して飼育した第3群（第2群と同一ロット）では，900日間以上の飼育期間中，魚体および飼育装置内からN. hirameは確認されなかった。このことから第2群に検出されたN. hirameは，同一の飼育系統内で飼育されていた第1群から伝播したと考えられる。
前述のとおり，N. hirame成体を駆除できる8％あるいは5％食塩添加海水による塩水浴では多数のヒラメが死亡した一方で，3％食塩添加海水浴ではN. hirame成体は駆除できない。また，いずれの処理もヒラメに寄生するN. hirameを駆除するためのものであり，飼育装置内の卵・浮遊幼生は塩水浴後も残存すると考えられる。そこで，ヒラメの生存に影響を及ぼさずにN. hirame成体を駆除することを目的として，既報の「麻酔をしたうえでピンセットなどを用いて口腔壁の虫体を物理的に取り除く」記載（良永，2017），およびヒゲソリダイHapalogenys nigripinnis親魚の寄生虫対策を目的とした淡水浴において，麻酔の併用により魚体への負担を減じることができる知見（渡邉ら，2023）を参考として，以下に示す塩水浴・虫体の摘出処理を行った。また，飼育装置内に残存した卵・浮遊幼生がヒラメに寄生した後に，成体となり産卵をする前に再度の処理を行うことにより，飼育装置内からN. hirameの全生活段階を駆除することを視野に入れ，処理間隔についても検討した。
塩水浴・虫体の摘出処理では，ヒラメを1個体ずつ，2-フェノキシエタノール 400 mg/Lと食塩8％を添加した海水中に5分間浸漬し，麻酔後のヒラメの口腔内（上顎中央および咽頭歯間付近）を肉眼で確認しながらN. hirame成体をピンセットで除去するとともに，除去しきれなかった成体を殺滅する目的で上顎中央および咽頭歯間付近に食塩を塗布し，飼育水槽に戻した。以上の処理を飼育330日目，399日目，435日目，621日目，643日目，および939日目の計6回行った（表2）。なお，表2中の処理尾数の経時的な減少は，放射性物質分析用試料の採取や，飼育密度低減のための間引きによるものであり，N. hirame感染による死亡が原因ではない。
| 処理 回数 | 飼育*1 日数（日） | 処理間隔 （日） | 第1群 | 第2群 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 処理 尾数 | 口腔内*2 寄生率（％） | 上顎中央 寄生率（％） | 処理 尾数 | 口腔内 寄生率（％） | 上顎中央 寄生率（％） | |||
| 1 | 330 | 77 | 73 | 7 | 188 | 62 | 57 | |
| 69 | ||||||||
| 2 | 399 | 65 | 88 | 0 | 176 | 51 | 14 | |
| 36 | ||||||||
| 3 | 435 | 64 | 2 | 0 | 176 | 0 | 0 | |
| 186 | ||||||||
| 4 | 621 | 63 | 75 | 10 | 166 | 2 | 2 | |
| 22 | ||||||||
| 5 | 643 | 18 | 0 | 0 | 137 | 0 | 0 | |
| 296 | ||||||||
| 6 | 939 | 17 | 0 | 0 | 129 | 0 | 0 | |
いずれの処理でも処理後24時間以内にヒラメの死亡は生じなかった。処理間隔69日間（1～2回目処理）では高率の寄生が認められた。処理間隔36日間（2～3回目処理）では，第1群の64尾中1尾のみにN. hirame成体の寄生が確認された。寄生強度の低減に伴うヒラメ魚群の抗病性の向上を期待して，その後に処理は行わず飼育を継続したが，約半年後の飼育607日目に，プロテインスキマー処理水中にN. hirameの卵が確認された。その後，処理間隔22日間で4～5回目の処理を実施したところ，飼育1,111日目まで魚体および飼育装置内からN. hirameは確認されなかった。
N. hirameの孵化仔虫がヒラメに寄生してから成熟し成体内に卵が確認されるまでの日数は，水温15°Cでは59日間，20°Cでは38日間とされている（堤，2004）。処理間隔69日間では，飼育装置内に残存した卵や孵化仔虫がヒラメに寄生し，成長していることが考えられた。処理間隔36日間では，N. hirame成体の寄生強度は低下したものの根絶はできず，約半年後に再度寄生が確認された。処理間隔22日間では，魚体および飼育装置内からN. hirameは確認されず，飼育装置内からN. hirameの全ステージを駆除できたと考えられた。より短い処理間隔とする場合には卵や孵化仔虫の生存期間を考慮する必要があり，また，水温の違いによっても適切な処理間隔は異なる可能性があることから，さらなる検討が必要である。また，海水取水に伴う寄生虫の侵入がない閉鎖循環式飼育において，適切な間隔で実施する2回の処理については，食塩8％添加海水5分間浴（ピンセットでのN. hirame成体の摘出は行わない，塩水浴後の死亡を防ぐためには麻酔を併用）の1回目処理で成体を駆除し，食塩3％添加海水30分間浴の2回目処理で仔虫を駆除することでも，魚体および飼育装置内からN. hirameを根絶できるかもしれない。
ヒラメ第1群と第2群（飼育939日目の計測時全長：第1群，51±5 cm：第2群，43±5 cm）のN. hirame成体の寄生部位を比較すると，平均全長の小さい第2群のほうが上顎中央付近の寄生率が高い傾向であった（表2）。また，塩水浴・虫体摘出と全長の計測（全長 43±4 cm；最小 33 cm，最大 53 cm）を同時に実施した飼育621日目には，寄生が確認されたヒラメのうち，全長 45 cm以上のヒラメではすべて咽頭歯間のみに，全長 45 cm未満では31％が上顎中央に，それぞれN. hirame成体の寄生が確認された。以上の寄生部位の傾向は，良永（2017）の「大型のヒラメでは咽頭歯の間に，小型のヒラメでは上顎の中央付近に寄生していることが多い」の記載と合致していると考えられた。
本報では，閉鎖循環式ヒラメ飼育において発症したネオヘテロボツリウム症に対して既存の塩水浴を実施したが，N. hirameの駆除には至らなかった。そこで，1尾ずつヒラメを処理する塩水浴・虫体摘出を実施したところ，水温18°Cでは22日間の間隔で処理を行うことにより，N. hirameを駆除できると考えられた。なお，渡邉ら（2023）の知見を参考に麻酔剤として用いた2-フェノキシエタノールは，ヒラメを対象とした水産用医薬品として登録されていない（農林水産省，2025）ことに留意する必要がある。また，本報では処理の対象としたヒラメが多くても250尾程度であったため，1尾ずつヒラメを処理する塩水浴・虫体摘出を複数回実施することが可能であった。産卵用親魚の閉鎖循環方式での飼育など，少数のヒラメを対象とする場合には本報の塩水浴・虫体摘出処理は有効と考えられる。今後は，より省力化が可能な対症療法の確立が課題となる。
国立大学法人 東京大学大学院農学生命科学研究科 特任教授 良永知義博士には，N. hirame虫体の判定方法や治療方法などに関して有益なご助言を多々いただくとともに，本稿のご校閲をいただいた。東京パワーテクノロジー株式会社の関係各位には，ヒラメの飼育や塩水浴の実施などに際してご協力をいただいた。ここに記して感謝を申し上げる。
