Multiplex PCRによるCryptococcus neoformans 血清型同定の改良法

抄録

目的：病原性真菌Cryptococcus neoformans は３亜種および５血清型に分けられる。2004年に市販の血清型同定キットが中止になったため、我々は血清型を分ける方法として、multiplex PCRで同定する方法を報告した(Mycoses 50: 277-281, 2007)。しかし、ヤトロン血清型同定キットでは血清型Bと判定された株の中に、このPCR法では血清型Cと同定される株が入っていた。そこで、改良 multiplex PCR法を開発したので報告する。
材料と方法：使用菌株は５種の血清型、合計21株を使用した。新しくプライマーをLAC1 から2つ(No.5と6)、CAP4 から2つ(No.1と2)を加え、2段階で行う。最初は、LAC1 のNo.2～5とCAP4 のNo.1と2の計６プライマーでmultiplex PCRを行ない、次に血清型AおよびDの株はCAP4 のNo.1と2でPCRを行なうことで血清型Aに特異的な１バンドの存否でADの判別を行なう。また血清型BおよびCの株はLAC1 のNo.2,4～6の４プライマーでBまたはCの判別を行なう。
結果：5種の血清型A、D、AD、B、およびCの菌株をうまく判別同定できたことを報告する。
(会員外共同研究者；トリノ大学 Valerio Vidotto)