低リン酸耐性ニンジン培養細胞におけるplasma membrane H⁺-ATPaseの貢献

抄録

　リン酸Alを唯一のリン酸給源として選抜されたニンジン培養細胞（LPT細胞）は、クエン酸を多量に放出することによりリン酸を獲得し、生育することができる。これまでに、この機構に関わる因子として分子生物学的にクエン酸合成酵素、NADP特異的イソクエン酸脱水素酵素を、生理学的にアニオンチャネル、PM H⁺-ATPaseを付きとめている。本研究では、PM H⁺-ATPaseに焦点を起き分子生物学的な解析を行った。
　クエン酸放出時には、PM H⁺-ATPaseを介してH⁺が放出されており、LPT細胞でその活性が高いことがわかっている。そこでde-generate PCRによりcDNAを単離し、6種類のisoformの存在を確認した。転写量解析の結果、DcPA1;1（Daucas carota proton ATPase）がLPT細胞で3倍転写量が高く、高活性に最も貢献していると考えられた。更にこのDcPA1;1をanti-senseによりLPT細胞で抑制したところ、活性の減少とクエン酸放出の減少に高い相関が認められ、PM H⁺-ATPaseの必須性がうかがえた。