抄録
真核細胞は、細胞内にタンパク質凝集体を形成することが知られている。タバコ培養細胞BY-2株にチトクロムb5とRFPの融合タンパク質を発現させた場合、RFPは増殖期に凝集パターンを呈し、定常状態期には液胞内に検出された。そこで我々は、RFPの蛍光を指標にタンパク質凝集体の液胞移行について解析を行った。様々な細胞小器官に対するマーカー抗体を用いた間接蛍光抗体染色法により、ドット状のRFP (RFP aggregate; Rag)の蛍光は各種の細胞小器官と異なる局在を示したことから、既知のオルガネラではないことが推定された。そして、微細構造観察により、Ragは脂肪粒のような凝集体であった。Ragの液胞移行を誘導する条件を検討した結果、栄養飢餓条件で、RFPの蛍光が液胞に観察された。栄養飢餓条件下で、プロテアーゼ阻害剤(E-64)を加え培養した場合、Ragは液胞移行せずに核のオートリソソーム様の構造体内に観察されることから、オートファジー機構により液胞内へ取り込まれることが示唆された。そこで、酵母のオートファジーに中心的な働きを担っているApg8のBY-2ホモログとYFPの融合タンパク質を発現させて動的解析を行った。その結果、リング状のオートファゴソーム(AP)が形成され、APは液胞へ移行することが確認された。そして、RagはAPにより取り込まれていた。以上の結果から、Ragは栄養飢餓条件でオートファジー機構により液胞へ取り込まれることが推定された。
