抄録
DNA損傷乗り越え複製（TLS）は、様々なDNA変異原に対する曝露によって生じるDNA損傷の影響を回避するために、生物が備えている機構の一つである。我々はこれまでに、酵母の誤りがちな損傷乗り越え複製（error-prone TLS）に関わるREV1遺伝子のシロイヌナズナにおけるホモログであるAtREV1遺伝子を同定した。AtREV1遺伝子破壊系統（rev1）は、UV-BやDNA架橋剤に対して感受性を示すことから、植物にも他の生物同様error-prone TLSが存在し、様々なDNA損傷の回避に関与している可能性が示唆されている。
今回さらに詳細な研究を行うために、大腸菌タンパク質過剰発現系を用いてAtREV1組み換えタンパク質を調整し、ポリメラーゼ活性の検出を試みた。AtREV1タンパク質はアフィニティカラム及びイオン交換カラムにて精製し、得られた精製タンパク質を用いてprimer extension法による塩基挿入活性の測定を行った。その結果、AtREV1タンパク質は、鋳型DNAの塩基にかかわらずプライマー末端にシトシンを挿入した。鋳型DNAのグアニンに対しては、チミンを挿入する活性も見られた。また、弱いながらも正確な塩基の挿入も観察された。これらの結果から、AtREV1タンパク質はシチジルトランスフェラーゼ活性をもつ“忠実度の低い”DNAポリメラーゼであることが明らかとなった。
