抄録
我々は、イネ NPP について研究を進めている。イネにおいては、6つのNPP遺伝子が存在し、これらNPP遺伝子の過剰発現イネ細胞を作成し、生合成されたレコンビナントNPPをレクチンおよび陰イオン交換カラムクロマトグラフィーを用いて精製し、酵素学的諸性質を調べた。NPP1 とNPP6はデンプン生合成の前駆体であるADP-グルコースの分解活性を有していた。解析したすべてのNPPアイソザイムは、コンカナバリンAレクチンに結合することからN－結合型糖鎖を持つ糖タンパク質であることが分かった。さらに、各NPPとGFPとの融合遺伝子をイネ細胞に導入し、共焦点レーザー顕微鏡によりその細胞内局在を観察したところ、NPP1-GFP、NPP2-GFP、NPP6-GFPのGFP蛍光の70%以上がプラスチドに局在していた。これまで、糖タンパク質はER―ゴルジ体で合成されることからプラスチドに存在することは考えられてこなかった。そこで我々は、このプラスチドに局在する糖タンパク質NPP1を、グライコブロット法により糖鎖構造解析を行った。その結果、プラスチドに局在するNPP1の糖鎖は、27種類のN-結合型糖鎖を有し、高マンノース型糖鎖が14.9%、複合型糖鎖は、53.8%、少マンノース型が31.3%含まれていた。このことから、NPP1がゴルジ体を経由してプラスチドに局在していることが示唆された。
