抄録
紫外線B（UVB: 280-320 nm）照射によって生じる主なDNA損傷であるシクロブタン型ピリミジン二量体（CPD）を修復するCPD光回復酵素は、イネのUVB耐性を左右する主要因子である。我々は、イネから精製したCPD光回復酵素がリン酸化修飾を受けていることを報告してきた。リン酸化修飾が酵素機能に与える影響を明らかにするためには、リン酸化修飾を受けるアミノ酸配列を同定することが重要である。そこで我々は、部位特異的変異導入法とタンパク質の強制発現系を用い、リン酸化修飾を受けないCPD光回復酵素を発現するDNA配列を見出すことで、リン酸化部位の同定を試みた。これまで我々は、大腸菌において発現・精製したイネCPD光回復酵素は、リン酸化修飾を受けないことを見出している。そこで、大腸菌よりも翻訳後修飾が起こりやすいとされる昆虫培養細胞抽出液を用い、無細胞タンパク質合成系により合成したイネCPD光回復酵素のリン酸化の有無を検出したところ、リン酸化修飾を受けていることを見出した。そこで、部位特異的変異導入法により、リン酸化修飾をうける可能性のあるアミノ酸配列をアラニンに変異させたCPD光回復酵素配列を作製し、昆虫培養細胞抽出液を用いた無細胞タンパク質合成系を用いて合成させた。この結果を含め本発表では、CPD光回復酵素のリン酸化修飾が酵素機能に与える影響を考察したい。
