組織あるいは細胞内の標的とする遺伝子の局在を可視化するin situ PCRについて,その前処理として行う組織固定法,蛋白消化処理法, DNA損傷部位のマスキング法などの至適反応条件を検討した。BALB/C mouseの肝組織についてKi-ras癌遺伝子のエクソン部分を標的とするプライマーを用い,逆転写反応(RT)とDNAポリメラーゼ連鎖反応(PCR)の両方を触媒するrTth DNAポリメラーゼを使用して検討した結果,等張緩衝ホルマリン液による浸漬固定は15〜24時間が, pepsin処理は2mg/ml 0.1N HClの濃度で15〜17分間が最適条件である事が分かった。更にPCRの前に,ホルマリン及びパラフィン包埋時に生じたと考えられるDNA鎖損傷部位からのDNA合成反応を抑制するため, ddTTPを用いたDNA合成開始部位のマスキングを行う必要があることを明らかにした。
