体外受精マウス胚に使用した培養液中のcell free DNA量の検討

抄録

緒言：日本においても2020年に6万人近い新生児が生殖補助医療（ART）の恩恵をうけて出生している。体外受精した胚の状態を評価する方法として，胚生検による着床前遺伝子検査が，すでに臨床応用されている。しかし，その侵襲が胚変性を惹起する可能性が残されている。培養液中に認められるcell free DNA（cfDNA）は生検にかわり着床前診断を行う胚の無侵襲な評価方法となりうる。今回，溶液中のcfDNAを回収し，定量することで解析の実用性を検討した。

方法：マウス卵を体外受精させ，胚盤胞期胚を得るために5日間培養した。胚盤胞期胚に発育した胚の培養液のDNAの回収を試みた。マウス脳組織DNAをコントロールに用い，リアルタイムPCRを使用した検量線法による溶液中のDNA定量を行った。

結果：個別の培養液のDNAは微量であった。5日目の培養液中に平均900 pg前後のDNAが含まれていると推定した。

考察：エタノール沈殿処置を行い，マウスの培養液からcfDNAが回収可能となった。cfDNAは培養細胞の状態を無侵襲に評価でき，胚の評価に応用できる可能性がある。一方，胚培養液中のcfDNAはごく微量であり，その回収に当たっては，その後の解析に合わせた精製方法の選択が必要と考えられた。