非カテコール型フラボノイドによるアミロイド β の凝集抑制機構

抄録

【緒　言】

　アルツハイマー病（AD）の原因物質と考えられている42残基のアミロイド b タンパク質（Ab42）は，分子間 b シート構造を形成することによって凝集し，脳内に蓄積する．近年，この過程で形成される凝集中間体であるオリゴマー（2あるいは3量体を基本単位とした2 ~ 24量体）が神経細胞毒性を示すことが知られている．Ab42の凝集はAD発症の15年以上前から起こる最も初期の病理変化であることから，凝集を阻害する化合物はADの予防薬となる可能性がある．野菜や果物に含まれるフラボノイドの多くはAb42の凝集抑制能を示すことから注目されているが，その抑制機構の詳細は不明な点が多い．

　本研究グループはこれまでに，マリアアザミ種子のメタノール抽出物であるシリマリンが，in vitro及びin vivoにおいて抗AD活性を示すことを明らかにするとともに¹⁾，シリマリン中のAb42凝集抑制活性成分として，カテコール構造を有するフラボノイドである (+)-タキシフォリンを同定した²⁾．さらに，(+)-タキシフォリンは，溶存酸素により酸化されてo-キノン体を形成し，Ab42の16あるいは28番目のリシン残基（Lys16, 28）と共有結合（マイケル付加）することによって，凝集を抑制することを明らかにした³⁾（図1）．一方，カテコール構造をもたない一部のフラボノ

図1. カテコール型フラボノイドによるAb42凝集抑制機構³⁾．Lys残基は分子間 b シート領域に含まれることから，付加体を形成することで分子間 b シートの形成を阻害していると考えられる．

図2. 非カテコール型フラボノイドの構造およびフラボノイド非存在下／存在下での¹H-¹⁵N SOFAST-HMQCスペクトル．黒はフラボノイド非存在下でのAb42（25 mM）のスペクトル，灰色は各種フラボノイド存在下（500 mM）でのAb42のスペクトルを示す．Kaempferol^oxはケンフェロール酸化分解物を表す．

イドにも凝集抑制作用が認められている．本研究グループの先行研究において，非カテコール型フラボノイドはリシン残基を標的とせず，別のメカニズムを介して凝集を抑制している可能性が示唆された³⁾．本研究は，非カテコール型フラボノイドによるAb42凝集抑制機構を分子レベルで解明することを目的としている．

【方法および結果】

1. モリンおよびダチセチンによるAb42の凝集抑制機構の解析

　本研究では，タキシフォリン（25 mMのAb42の凝集能を50% 阻害するのに要する濃度：IC₅₀ = 33.0 mM）と同程度の凝集抑制能をもつ非カテコール型フラボノイドとして，モリン（IC₅₀ = 30.3 mM），ダチセチン（IC₅₀= 55.4 mM），ケンフェロール（IC₅₀= 75.1 mM）に着目した（図2）．まず，空気酸化による凝集抑制能への影響を調べるため，チオフラビンT蛍光法を用いて，低酸素条件下（デシケーター中アルゴン雰囲気下）における凝集抑制能を調べた．その結果，いずれも通常の酸素濃度下と同様に凝集を抑制した．また，モリンとダチセチンのUVスペクトルは48時間

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