抄録
近年同定された腎臓に存在する尿酸トランスポーターは，尿酸の分泌・再吸収に関係することから，血清尿酸値を規定する存在として注目されている．既存のトランスポーター評価法には[14C]標識尿酸を用いた方法があるが，細胞を破砕した試料を使用するため，経時的な尿酸輸送評価などは不可能である．そこで本研究では，生細胞において経時的に細胞内尿酸を検出可能なプローブを開発することを目的として，uricase-HyPer融合タンパク質を構築した．ここでは，尿酸が尿酸代謝酵素uricaseにより酸化される際の副生成物である過酸化水素に着目した．過酸化水素と反応し蛍光を変化させるタンパク質HyPerとuricaseを融合させることにより，uricaseによる尿酸の酸化時にHyPerが発する蛍光によって尿酸を検出することが可能なツールを構築した．結果，URAT1を恒常的に発現するCOS7細胞にuricase-HyPer融合タンパク質を強制発現させると，10-200μM尿酸添加に伴い有意に蛍光強度比が上昇することが示された．さらに尿酸と共にトランスポーター阻害薬ベンズブロマロンを0.1-10μMとなるよう添加すると，その蛍光強度比は有意に低下した．これらのことから，uricase-HyPer融合タンパク質によって尿酸トランスポーターを介した尿酸取り込みの蛍光検出が可能であることが示された．本手法は経時的な尿酸量の変化を検出でき，かつ簡便に多検体処理が可能であることから，トランスポーター阻害薬の新規スクリーニングなどに有用であると考えられる．
