作物保護
煮沸法によるキクスタントウイロイド（CSVd）RNAの抽出
2003 年 2 巻 1 号 p. 51-54
詳細
2003 年 2 巻 1 号 p. 51-54
CSVdの感染の有無をドットブロットハイブリダイゼーションで診断するため，RNAの抽出法を改良した．
1．キク成熟葉を等量のCTABバッファーで磨砕し，上清を煮沸して遠心分離し，上清に酢酸ナトリウムとイソプロパノールを加え，2Mの塩化リチウムに重層，遠心する方法でCSVd-RNAを抽出した．この煮沸法は，フェノールなどの劇物を必要としない安全な抽出法である．
2．ノーザン分析では，煮沸法で抽出されたCSVd-RNAの一部は分解されて低分子化したが，一部は分解されずに残存していた．この結果は，煮沸法で抽出されたCSVd-RNAを用いたRT-PCRで期待されるサイズのDNAが得られたことからも確かめられた．
3．CSVdを保毒したキク葉をCTABバッファーで磨砕し，煮沸法およびフェノール抽出で精製したRNAをドットブロットハイブリダイゼーションで検出したところ，煮沸法はフェノール抽出よりかなり強いシグナルが得られ，CSVdの検出感度が高いことが分かった．
