土壌締固めとリアルタイムPCRを介したダイズシストセンチュウ新規検出法

抄録

リアルタイムPCRを用いたダイズシストセンチュウ（以下、SCN）の定量を目的として、特異的プライマー（SCN44f、SCN124r）を設計した。SCNに汚染された黒ボク土を100 mlの円筒コアに充填し、土壌締固め機を用いて様々な強度（乾燥密度0.93-1.4 g cm^-3）で締固めてからDNAを抽出し、リアルタイムPCRを行った。無処理土壌（0.66g cm^-3）からの結果と比較して、最大に締固めた1.4 g cm^-3の土壌ではCt値が4回小さくなった。そのため、締固め処理によりSCNのシストと卵が土壌中で破壊され、16倍多くSCNのDNAが検出されるようになったと推察された。SCN非汚染の黒ボク土20gにSCNを10～3,000卵投入し、1.4 g cm^-3の強度で締固めたところ、Ct値と投入したSCNの卵数との間には有意な相関関係が認められた(r² = 0.8615、P < 0.001)。以上、締固め法とリアルタイムPCRを組み合わせることで、土壌中のSCN数を迅速・簡便に定量できることが示された。