マウス卵母細胞が顆粒膜細胞でのmiR-322発現を抑制する

抄録

【目的】哺乳類の卵母細胞の正常な発達には，周囲の顆粒膜細胞（卵丘細胞：CC，壁顆粒膜細胞：MG）が重要であり，一方で顆粒膜細胞の分化・機能制御には卵母細胞が分泌する増殖因子（卵因子）が大きな役割を果たす。一般に，細胞の分化・機能制御には，小分子非コードRNAであるマイクロRNA（miRNA）の関与が知られる。しかし，卵因子が顆粒膜細胞の分化・機能を制御する過程にmiRNAが関与しているのか，それどころか，顆粒膜細胞内において，卵因子による発現制御を受けるmiRNAが存在するのかさえ不明である。そこで本研究では，顆粒膜細胞において卵因子によって発現制御を受けるmiRNAを同定することを目的とした。【方法】CCとMGは卵母細胞との距離が異なることから，CC・MG間で発現差のあるmiRNAは卵因子の制御を受けている可能性がある。そこで，妊馬血清性性腺刺激ホルモンで刺激した3週齢B6D2F1雌マウスよりCC，MGを採取し，miRCURY LNA miRNA ArrayシステムによるmiRNAの網羅的発現比較を行った。また，卵母細胞との共培養（2 個/ μl）がMGにおけるmiRNA発現に与える影響を，リアルタイムPCRで解析した。【結果】マイクロアレイ解析により，CC・MG間で発現差の示唆されるmiRNAが複数同定された。これらについてリアルタイムPCRで発現を解析した結果，miR-322-5p（以下322）についてMGでCCの約10倍の発現が確認された（P<0.05）。また，卵母細胞との共培養によって，MGにおける322の発現は有意に抑制された（P<0.05）。これらのことは，卵因子がCCにおける322の発現を抑制することによって，CCとMG間で322の発現差が生じていることを示唆している。本研究では，CCとMGにおいて発現差のあるmiRNAが存在すること，そして，その発現差に卵因子が関わっている可能性を初めて明らかにした。