ブタ単為発生胚への孵化補助操作が胚発生に及ぼす影響

抄録

【目的】ブタ体外生産胚は，近年培養液の改良に伴い胚盤胞へ発生した胚を仮親へ胚移植を行って産子を得られるようになったが，体内発生胚に比べて質が低い傾向が認められる。その質への影響の1つに孵化率が低いことが予想された。そこでブタ単為発生胚への孵化補助操作が体外培養後の孵化率および胚の質に及ぼす影響を調査した。【方法】ブタ単為発生胚は，体外成熟卵子に1.5 kV/cm，100 μsec 1回の条件で電気的刺激による活性化処理を行った後，サイトカラシンBを添加したPZMにて2時間処理を行い，作出した。ブタ単為発生胚は，PZMにて6日間体外培養した。透明帯への孵化補助操作は 1) 鋭利なピペットで透明帯を切開する方法とピエゾマイクロマニピュレータを用いて 2) 透明帯を穿孔する方法，3) 透明帯を菲薄化する方法および 4) 透明帯を菲薄化した後に1カ所穿孔する方法を用いて実施した。培養後2–5日目の発生段階の異なる胚で，1)–4)の操作をそれぞれ実施し，胚盤胞発生率，孵化率および胚盤胞の平均総細胞数を比較した。対照区は体外培養後2–5日目の発生段階の異なる無処理の胚を用いた。【結果】体外培養後2–5日目の各発生段階で 1)–4)の操作を実施した結果，胚盤胞発生率に差は認められなかった。一方，各発生段階で 1)–4) の操作を実施し孵化率を比較した結果，各対照区（1.1–1.4%）に比べて全ての孵化補助操作区（17.0–53.8%）の方が有意に高くなった。各発生段階で孵化補助操作を実施し，胚盤胞まで発生した胚の総細胞数を比較した結果，体外培養後5日目の胚の 4) の処理区（47.5）において他の区（27.9–40.6）に比べて細胞数が有意に増加した。さらに孵化した胚盤胞の総細胞数を比較した結果，体外培養後5日目の胚の 4) の処理区が最も多くなることが認められた。以上より，孵化補助操作において，透明帯を菲薄化した後に1カ所穿孔する方法がブタ単為発生胚の質に最も影響を及ぼすことが示唆された。