土木学会論文集
Online ISSN : 2436-6021
特集号(環境工学)論文
高感度蛍光in situハイブリダイゼーション法と蛍光細胞分取装置を使用した培養非依存的な環境中の薬剤耐性菌の網羅的検出
井口 晃徳五十嵐 光哉星野 琴音山本 凌太堀 沙織里山口 利男上村 繁樹大久保 努重松 亨
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2023 年 79 巻 25 号 論文ID: 23-25045

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抄録

 CARD-FISH法とFACSを併用した,プラスミドDNA由来の薬剤耐性遺伝子と細菌種を結びつける,培養非依存的な薬剤耐性菌の網羅的な解析技術の開発を試みた.大腸菌E. coli菌体とpCR2.1 TOPOプラスミドベクターを使用し,Class A βラクタマーゼTEM-1遺伝子を標的としたモデル実験を行った結果,TEM-1遺伝子を保有するE. coli菌体の蛍光検出が可能であった.活性汚泥試料に本手法を適用し,リアルタイムPCR法による遺伝子定量を行った結果,フローサイトメトリーによるソート前と比較してTEM-1遺伝子が6.2倍〜45.3倍に濃縮され,本手法の有効性が確認できた.さらに,ソート後のサンプルでは,Bacilli綱やNegativicutes綱,Othersなどの割合が増加していたことから,これらが活性汚泥における主要なTEM-1遺伝子保有耐性菌であることが示唆された.

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© 2023 土木学会
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