植物新規Ca²⁺結合タンパク質RVCaBの構造学的，物理化学的特徴

抄録

ダイコン(Raphanus sativus)の液胞膜から単離されたCa²⁺結合タンパク質（RVCaB）は，既知CaBとの類似性はなく，全アミノ酸（248残基）の約1/3をグルタミン酸が占め、芳香族アミノ酸やシステインを含まない，きわめてユニークな可溶性の酸性タンパク質である。Ca²⁺がないと発現が誘導され，高濃度Ca²⁺で著しく減少するなどCa²⁺応答性の高い点も特徴である。機能理解をめざし，本研究ではRVCaBのタンパク質化学的特徴を明らかにすることを目的とした。　　
　大腸菌発現系をもちいてRVCaBを発現させ，これを高収率で，高純度標品として大量精製した。CDスペクトル解析の結果は、不定形のランダムコイル構造を示した。さらに90℃に昇温すると微妙な構造変化が示されるが，これを20℃に降温すると元の構造に戻ることが示された。常温ではCa²⁺（10mM CaCl₂）の有無での構造上の顕著な変化はみられないが，高温でのスペクトルに小さな差が見られた。これはCa²⁺との結合が微小な構造変化を伴うことを示している。また高感度等温滴定カロリメトリー法でCa²⁺結合を分析した結果、4つの高親和性Ca²⁺結合サイトが存在することが明らかになった。その他、詳細な結果も合わせて生理学的役割を考察したい。