抄録
我々の研究室では、シロイヌナズナの培養細胞からintact液胞を単離することにより、純度の高い液胞膜を精製することに成功している。さらにこの液胞膜を用いて質量分析を行なうことで、液胞膜に存在すると思われるタンパク質の網羅的な解析を行ってきた。同定したタンパク質の中には液胞膜タンパク質としてすでに知られている以外に未知の膜貫通タンパク質も含まれていた。液胞の生理機能から液胞膜にはさまざまな輸送体の存在が考えられるが、分子レベルでの確認をなされているものは少ない。そこで、我々は特にリン酸代謝に関連する輸送体タンパク質の同定を目指し、得られた膜タンパク質の中から、リン酸欠乏応答遺伝子が持つ特異的な配列をプロモーター領域に含むものを選び出し、さらに詳しい解析を進めることにした。まず、実際にそれらのタンパク質が液胞膜に局在するかを確認するため、GFP融合タンパク質をシロイヌナズナの培養細胞に一過的に発現させることで、プロテオームデータの信頼度を検討した。次に、これらのタンパク質の機能解析を行なうため、形質転換やその後の解析実験が容易なタバコ培養細胞BY-2にGFPとの融合タンパク質を導入、または強制的にタンパク質を発現させることで、リン酸に対する応答を調べている。また、リン酸代謝異常を示す変異体から液胞を単離して、リン酸代謝機構との関連を検討しているので、それについても併せて報告する予定である。
