マウスvibrissaeを用いた毛包組織器官培養法の確立とその応用

抄録

毛成長を定量的に解析するin vitroの評価系として，マウスvibrissaeを用いた毛包組織器官培養法の培養条件を検討し，次のような結果を得た．①3～15日齢のマウスから採取した毛包の毛球部のDNA合成は一定であり，毛球部は12日齢マウスまで増大を続けた．②個々のvibrissaeの部位別の検討では鼻側よりも眼側の左右2例の方がDNA合成が高かった．③毛伸長および毛球部DNA合成はともに培養96時間まで直線的に増加した．培養96時間後も毛球部の形態は正常であった．④培養条件は，通常（5％CO2-95％air，37℃）のものよりも高酸素（5％CO2，95％O2）かつ低温度（31℃）の方が毛母細胞の変性がなく，毛球部の正常構築が保たれていた．⑤培養液への牛胎児血清の添加は無添加でも1～20％添加しても毛球部のDNA合成にほとんど影響を与えなかった．これらの結果から，9日齢のB6C3F1マウスの眼側縦2列vibrissaeを血清無添加，95％　O2-5％　CO2で31℃，72時間培養することは，毛包の器官培養系として極めて有用であると考えられた．そこで，本条件下に各種の抗癌剤あるいはサイトカイン等の毛球部DNA合成への影響を比較検討した．その結果，抗癌剤ではcytosine arabinoside，mitomycin C，endoxan，methotrexateおよびadriacinなどで強いDNA合成抑制が，サイトカインではtumor necrosis factor-α，interleukin-1αでDNA合成抑制作用が認められた．一方，hepatocyte growth factor/scatter factorは，調べた物質のなかでは唯一毛球部のDNA合成を促進させた．以上，マウスvibrissaeを用いた器官培養法は，①材料が容易に入手出来ること，再現性と定量性において優れること，②血清の影響を受けないこと，などの点でin vitroの評価系として優れていると考えられた．そして，③この培養法は脱毛や発毛作用を有する物質のスクリーニングなどに有用であることが各種抗癌剤，growth factorを含むサイトカインなどを添加した系で示された．