抄録
蛍光性のSH試薬であるBIPM (N-[P-(2-benzimidazolyl) phenyl] maleimide) で修飾したNa+, K+-ATPaseの蛍光強度 (F) 変化をもとに,強心配糖体ouabainとNa+, K+-ATPaseとの結合状態を調べた. 0.43mM Mg2+, 16mM Na+, 27μM ADPと27μM Pi存在下の酵素にouabainを添加すると, FとPiから形成されたリン酸化酵素 (EP) 量は,同じ時問経過でゆっくりと増加した. Fの増加の程度はouabain濃度に依存し, Hillプロットの結果, Hill係数nは0.27,見かけの親和性K1/2は0.84μMであった. 93μMとなるouabainを添加すると, FはK+感受性リン酸化酵素 (E2P) のFに類似した最も高いレベルへと増加し, EP量はMg2+, Na+とATP存在下で形成されるE2P量の50%程度まで増加した. ADPはouabain結合量には影響を与えることなくPiからのリン酸化を阻害した. 0.43mM Mg2+, 6mM Na+と27μM ADP存在下の酵素へのouabain添加によって生じるFの増加の程度は, 27μM Piの有無にかかわらず同程度であった. 2.6mMとなるとPiと27μMとなるADPは, Fの増加の程度には影響を与えることなく, Fの増加の速度をPiは促進しADPは遅らせた. Na+結合酵素にouabainを添加すると, Fは経時的にE2PのFに近いレベルまで増加した.これらの結果は, ouabainはNa+, K+-ATPaseの非リン酸化状態にも結合しうることと, ouabain結合Na+, K+-ATPaseはリン酸化の有無にかかわらずE2Pとほぼ同程度の高いFを示すコンフォーメーションにあることを示唆する.
