還元末端オリゴキシラナーゼ[EC 3.2.1.156](REX)はキシロオリゴ糖を還元末端側から加水分解するアノマー反転型酵素である．野生型REXにα-X2-FとX1を作用させると，いわゆる “Hehre resynthesis-hydrolysis” と呼ばれる反応を触媒した．REXをグライコシンターゼに変換するために，REXの触媒塩基であるD263にsaturation mutagenesisによって種々のアミノ酸に置換した変異型酵素を作製し，α-X2-FとX1を作用させてグライコシンターゼ反応を調べた．9種のD263変異型酵素がグライコシンターゼ反応産物であるX3を生成したが，これらの酵素の中でD263Cが良いグライコシンターゼであった．しかし，これらの変異型酵素は，X3が生成するとともに加水分解産物であるX2を生成した．REXの活性部位構造を詳細にみると，求核試薬として作用する水分子がD263およびY198と水素結合を形成していることが判明した．次にY198に変異を導入したY198FとD263C/Y198FおよびD263N/Y198Fを作製した．これらの変異型酵素によるX3加水分解活性は，野生型酵素と比較して大幅に減少した．またY198Fのα-X2-F消費能は野生型の1.5倍であったが，D263N/Y198Fは1/10以下であり，D263C/Y198Fは微弱な活性しか示さなかった．次にY198FとD263N/Y198Fによるグライコシンターゼ反応の経時変化を調べると，X3が効率良く蓄積され，分解産物であるX2がほとんど検出されなかった．さらに，両酵素によるα-X2-F消費能の比活性を比較すると，Y198FがD263N/Y198Fより約20倍程度高かったので，Y198Fが最も良いグライコシンターゼであると総合的に判断した．
