マウス卵成熟過程におけるPTENの発現動態と阻害剤の影響

抄録

【目的】タンパク質チロシンホスファターゼであるPhosphatase and tensin homolog deleted from Chromosome 10(PTEN)は，ホスファチジルイノシトール3リン酸を脱リン酸化することで，PDK1やAktの活性化を抑制している。新生仔マウス卵巣をPTEN阻害剤とPI3K活性化ペプチドに暴露した場合，原始卵胞発育が促され，成熟卵が得られることが報告されている( Li et al., PNAS, 2010)。本研究では，卵成熟過程における直接的なPTEN不活化の影響を調べるため，PTENタンパク質の発現動態を明らかにし，成熟培地へのPTEN阻害剤添加の影響を調べた。【方法】過排卵処理したICR系野生型マウスから卵核胞(GV)期卵を採取し，20％O₂下で18時間培養(IVM)し，経時的に回収した卵を用いてPTENあるいはpPTEN抗体による蛍光免疫染色，ウエスタンブロット解析を行った。また，IVM培地へ0.1～10 μMのPTEN阻害剤bpV(HOpic)を添加し，IVM 10時間まで2時間毎の核相を観察した。さらにこれらの卵を体外受精させ，胚発生能を調べた。【結果】PTENおよびpPTENの局在は，全ステージで細胞質全体にみられ，特に卵核胞崩壊期(GVBD)と第一減数分裂前中期では染色体付近，第一および第二減数分裂中期（MI，MII期）ではPTENは紡錘体上に，pPTENは紡錘体極付近にみられた。pPTENタンパク質発現量は，IVM 4～8時間で高くなり，IVM 18時間で著しく減少した。PTEN阻害剤の添加培養では，1.0 μMと10 μM区でGVBDとMI期の早期化がみられ，MII期への到達は1.0 μM区で最も早かった。胚発生能は1.0 μM区で高い傾向があった。以上の結果から，マウスIVM系卵におけるPTENの不活化は，卵成熟の進行を早め，受精後の胚発生能に影響を与える可能性が考えられた。