【目的】近年我々は，黒毛和種体内受精胚における着床前ゲノム選抜技術を開発し，さらに経腟採卵-体外受精（IVF）技術と組み合わせたより効率的な育種改良の実現を目指している。本研究では，割球分離により作出した一卵性双子胚の片方をゲノム育種価評価，もう片方を胚移植に用いる技術体系の構築を目的に，割球分離胚におけるSNP解析精度および凍結保存法を検討した。【方法】食肉処理場由来のウシ卵巣から卵子を採取し，IVF胚を作出した。IVF後27時間目の2細胞期胚について，酵素処理により透明帯を除去してピペッティングで分離した割球をBS区，無処理の胚を対照区とし，個別管理培養ディッシュで6または7日間体外発生培養した。実験1：IVF後8日目におけるBS区の胚盤胞5個からそれぞれDNAを抽出し，SNP解析（50,019 SNPs）を実施した。実験2：IVF後7日目の胚盤胞を，7.5%エチレングリコール（EG），7.5%DMSOを含む平衡液および15%EG，15%DMSO，0.5 Mスクロースを含むガラス化液を用いてガラス化し，加温培養後の再拡張率と死細胞率を調査した。BS区では，平衡液/ガラス化液での処理時間が3分/60秒，2.5分/50秒，2分/40秒，1.5分/30秒の試験区を設定し，対照区は3分/60秒とした。また，BS-2.5分/50秒区のガラス化胚6個を1胚移植し，受胎率を調査した。【結果】実験1：SNP型判定率は95.6±0.85%であり，ゲノム育種価評価に必要な解析精度が得られた。実験2：BS-1.5分/30秒区における再拡張率は，対照区と比較して有意（p<0.05）に低かったが，その他のBS区と対照区間に差はなかった。死細胞率では，BS-2.5分/50秒区と対照区間に差はなかったが，その他のBS区は対照区と比較して有意（p<0.05）に高い値を示した。BS-2.5分/50秒区のガラス化胚の受胎率は50%（3/6）であった。以上より，割球分離法を活用した着床前ゲノム選抜技術の実用可能性が示された。
