抄録
【目的】早期妊娠因子（EPF）は、母体の胎児に対する免疫攻撃を抑制し、妊娠の成立に重要な働きをする物質と考えられている。主として母体の血中より検出され、当研究室では血清由来のものを特に超早期妊娠因子（Super-EPF）、それ以外の材料より検出される物質をEPF様物質と呼んで区別している。本研究では、効率の良い精製法の確立を目的とし、その工程により得られた精製物を用いて２D SDS-PAGEによるウシ超早期妊娠因子の解析を行なった。【方法】ウシ血清を３５％飽和および４０％飽和の硫酸アンモニウムにより塩析し、上清、沈澱の各分画をロゼット抑制試験（RITest）に適用し活性を調べた。その後、活性のあった分画を CM sepharoce Fast Flowによる陽イオン交換クロマトグラフィーに適用した。さらに、RITestにより活性のあった分画をSDS-PAGE、2D SDS-PAGEおよびイムノブロッティングに適用し、ウシ超早期妊娠因子の解析を試みた。【結果】最終的な活性分画の総タンパク量は33.5ODで、回収率は6.26％であった。この結果は以前の精製法よりも若干少ないものだった。しかし、その後の解析によって、これまでの精製法では検出できなかったSuper-EPFと思われる新たなタンパクスポットが確認された。したがって、この新しい精製法はEPF の精製にとって有効な方法と考えられる。精製物のSDS-PAGEによる解析では、20および50KDa付近に抗ウシSuper-EPFポリクローナル抗体と特異的に反応するバンドが確認され、さらに、２D SDS-PAGEの後にイムノブロッティングで解析した結果、20および25KDa付近に抗ウシSuper-EPFポリクローナル抗体と特異的に反応する３つのスポットが観察された。これら３つのスポットはSuper-EPFの重要な候補と思われ、この３つのスポットについてTOF-MSを用いて現在解析中である。
