抄録
【目的】
放射線等によって生成した活性酸素により DNA 前駆体に化学的修飾が生じ、損傷 DNA 前駆体が生じる。ヌクレオチドプール浄化酵素による分解は、損傷 DNA 前駆体が誘発する変異に対する重要な防御機構であると考えられる。哺乳動物細胞の MTH1、MTH2、NUDT5 は in vitro において、8-hydroxy-dGTP もしくは 8-hydroxy-dGDP を分解し、ヌクレオチドプール浄化酵素として作用すると考えられる。しかしながら、生細胞内でこの三者がヌクレオチドプールの浄化に寄与しているかは不明である。本研究では、siRNA を用いたノックダウンの系により、MTH1、MTH2 及び NUDT5 が 8-hydroxy-dGTP が誘発する変異の抑制に寄与しているのか検討した。
【方法】
ヒト 293T 細胞に MTH1、MTH2 及びNUDT5 に対する siRNA と変異検出用のsupF 遺伝子を含むプラスミドを導入した。さらに、24時間後に 8-hydroxy-dGTP を浸透圧シフトにより細胞内に導入した。48時間後に細胞内で複製されたプラスミドを回収し、indicator 大腸菌 KS40 / pOF105 株に導入し、supF 変異体率を算出した。
【結果】
MTH1、MTH2 及び NUDT5 を同時にノックダウンした細胞において、コントロール細胞に比較し、8-hydroxy-dGTP 導入による変異誘発が 2 倍上昇した。また、8-OH-dGTP 誘発変異である A:T → C:G トランスバージョンも上昇していた。現在、個々の蛋白質のノックダウン細胞において、各蛋白質の変異誘発抑制への寄与を検討中である。
【結論】
哺乳動物細胞において、MTH1、MTH2 及び NUDT5 は、ヌクレオチドプール浄化酵素として、8-hydroxy-dGTP により誘発される変異の抑制に関与している可能性が示唆された。
