大腸菌および乳酸桿菌用に構築したシャトルベクター pJLE121 による Lactobacillus casei L-49-4 のエレクトロポレーション

抄録

 大腸菌および乳酸桿菌に対するシャトルベクターを構築した。シャトルベクター pJLE121は Lactobacillus casei L-49由来プラスミド pLC494 の ori と repA, pJIR418 の pMB1(ori）およびグラム陽性菌とグラム陰性菌の選択マーカーとしてのエリスロマイシン耐性遺伝子を含んでいる。pJLE121 を使用して Lactobacillus casei L-49-4（L-49株のプラスミドフリー株）への形質転換効率を調べた。その結果，1.0%グリシンを含む MRS 液体培地で培養したのち，菌体を 10 mM MgCl₂ 緩衝液で洗浄し，10%グリセリン溶液に懸濁した菌体を 1.75 kV, 200 Ω および 25 μF の条件でエレクトロポレーションを行った時に，形質転換効率が最も高かった。シャトルベクター pJLE121 は数種類の乳酸桿菌に導入され，このベクターを導入して得られた形質転換体はグラム陽性菌の選択マーカーとしてのクロラムフェニコール耐性遺伝子を含むシャトルベクター(プラスミド pLC494 の ori および repA)から得られた形質転換体よりも生育速度が早かった。