ゲノム編集技術を用いた日本人高カバー率擬似HLAハプロタイプホモ歯髄細胞ストックの構築方法

抄録

ヒト白血球抗原（HLA）は自己と非自己を区別する役割を果たす。ドナーのHLA遺伝子がハプロタイプホモである場合，レシピエント側のHLAハプロタイプの少なくとも一方と合致すれば移植が可能である。しかし，HLAハプロタイプホモドナーの出現率は約100人にひとりと低く，日本人全部をカバーする細胞ストック構築は困難である。

われわれは，177人の歯髄提供者のHLA型を調べ，日本人の8割以上をカバーし得るHLAハプロタイプが含まれていることがわかった。そこで，HLA-A^*02,33;B^*44,-;DRB1^*13,-のHLA型を持つ歯髄細胞（DP144）を選び，HLA-A^*02ローカスに遺伝子欠損を誘導することで，擬似的なHLAハプロタイプホモの遺伝子型を持つ細胞の作製を試みた。HLA-A^*02ローカスを特異的に切断するよう設計したZinc Finger NucleaseをDP144に導入し，抗HLA-A02-FITCで細胞を蛍光標識したのち，FACSを用いてHLA-A02陰性画分を分取し培養を行った。

HLA-A02陰性画分の遺伝子配列を解析した結果，HLA-A^*02アリルに選択的な塩基の置換や欠失，挿入の他，HLA-H領域との融合変異を認めた。実験によって擬似的HLAハプロタイプホモ細胞が誘導できたことは，将来の移植用細胞バンクの構築に貢献し，再生医療の発展へと繋がるだろう。