断面研磨SEM法による地衣類電顕イメージング

抄録

地衣類は菌類と藻類が共存した共生体で、岩や石、コンクリート、木の表面など至る所に存在する。地衣類は硬い石や岩に接着し長い年月をかけて自生しているため、これまで形態解析はルーペやマクロレンズにより行われてきた。電子顕微鏡(電顕)による微細構造解析は表面のみに限られ、超薄切片作製が困難なことから内部微細構造解析はほとんど行われていない。我々は、地衣類が着生した石を丸ごと固定・樹脂包埋した樹脂ブロックを、ダイヤモンドバンドソーを用いて切断し、機械研磨後、その面を走査電顕 (SEM)で観察する“断面研磨SEM法”により、地衣類の超微形態の可視化に成功した。具体的には、地衣類が生えた2-3 cmの石や枝をアルデヒド固定液で前固定、オスミウムで後固定後、アルコール脱水し、プラスチックビーカーにエポキシ樹脂包埋した。ダイヤモンドバンドソーで5 mm厚の連続切片を作製し、研磨紙で機械研磨後、電子染色およびコーティングし、電界放出型SEM (FE-SEM)の反射電子検出器で撮像した。地衣類の一種ツブダイダイゴケが着生した石を観察した結果、鉱物質上の子器や子嚢の断面微細構造、さらにその中の共生藻と共生菌の微細構造を得ることに成功した。また、木の枝に自生したウメノキゴケの超微形態を捉えることに成功した。本技法は、これまで電顕で観察が困難であった鉱物質で着生した地衣類や苔類などの内部構造解析に有用な技術となる。