抄録
（目的）10％中性緩衝ホルマリン液で1日，7日および2週間固定したラットの肝臓からパラフィンブロックを作製し，RT-PCRでmRNAの増幅が得られるRNAを抽出するための条件を検討した。（材料と方法）雄性IGSラットの肝臓を採取して一部を10％中性緩衝ホルマリン液にて固定し，1日後，7日後および2週間後に，常法にしたがってパラフィン包埋した。その後10μmに薄切し，Optimum FFPE RNA Isolation Kitを用いて切片2枚からRNAを抽出した。それとは別に，凍結保存した肝臓からTrizolを用いてRNAを抽出した。得られたRNAの1μgを逆転写し，内部標準遺伝子であるGAPDH，β-actinおよび酵素CYP3A1についてABI PRISM 7000を用いてリアルタイムPCRを実施した。（結果）Kit標準のRNA抽出プロトコル（脱パラフィン→37℃ 3時間でproteinase K処理→フィルターに吸着→洗浄→溶出→DNase I処理）では，ホルマリン液での固定時間として24時間以内が推奨されており，本検討のような長時間の固定標本では良好なRNAは得られなかった。そこで，proteinase Kの処理温度と時間を変更（温度：45または60℃，時間：3，8，16または24時間）し，最適な抽出条件を調べた。その結果，ホルマリン1日固定のブロックでは60℃ 8時間，7日および2週間固定のブロックでは60℃ 16時間のproteinase K処理条件でmRNAが最も高率に検出された。mRNAの定量値は，ホルマリン固定時間が1日→7日→2週間と長くなるほど低下し，凍結標本との比較でそれぞれ7-17％，2-5％，1-2％であった。しかし，内部標準遺伝子との比率（GAPDHとCYP3A1，β-actinとCYP3A1の比）に，固定時間の延長による影響はみられなかった。（結論）ホルマリン固定時間の延長により経時的なmRNA定量値の低下が認められたが，各遺伝子の定量値の比率は保たれていたことから，適切な抽出条件では2週間固定後のパラフィンブロックでもmRNA発現量を調べることが可能であると考えられた。
