抄録
【目的】Reactive oxygen species（ROS）アッセイは，化学物質に光照射を行い，singlet oxygen (SO）とsuperoxide anion (SA)の生成を調べる光化学的特性試験の一つである．現在，ROSアッセイの有用性について，多施設バリデーションがJapanese Center for the Validation of Alternative Methods (JaCVAM)において実施されている．プレバリデーションの結果，陽性対照物質quinineでは，濃度依存的にSOが増加するのに対し，既知光毒性物質のchlorpromazine （CPZ）では濃度に逆比例して減少することが判明した．我々は，その原因を明らかにするため，光照射前後のCPZ含有反応液の解析を行った．
【方法】96ウェルプレートに入れたCPZ（20及び200 µM）を含む反応液を，擬似太陽光照射装置中で1時間照射し，p-nitrsodimethyl aniline 法によりSO産生量を測定した．また，光照射前後の反応液について250～700 nmの吸光スペクトルを測定するとともに，HPLCを用いて反応液を解析した．
【結果/考察】その結果，CPZ含有反応液では，光照射後に吸収波長のベースラインの上昇が認められ，その上昇は200 µMの方が20 µMより顕著であった．さらに，これらのサンプルをHPLC分析した結果，光照射したサンプルでは，分解されたCPZのピークがブロードに認められた．従って，CPZのSO値が用量に逆比例した原因は，光照射によって生じたCPZ分解産物が測定波長に影響したためと推定された．以上のことから，化学物質のSO生成を評価する際には，光分解物による影響を考慮する必要があると考えられた．
