Diabetic kidney disease (DKD) is often complicated by fibrosis and acute kidney injury (AKI), both of which contribute to progressive renal dysfunction. Pyruvate kinase M2 (PKM2), a key regulator of glycolysis, plays a pivotal role in cellular metabolism, inflammation, and fibrosis. Beyond its metabolic functions, PKM2 modulates hypoxia-inducible factor (HIF) signaling, macrophage polarization, and profibrotic pathways, influencing the progression of diabetic kidney fibrosis and susceptibility to AKI. Aberrant PKM2 activation in renal cells promotes extracellular matrix deposition, epithelial-to-mesenchymal transition (EMT), and oxidative stress, exacerbating kidney fibrosis. Additionally, PKM2-driven metabolic reprogramming and inflammatory cytokine production contribute to tubular cell injury and impaired renal recovery in AKI. Understanding the dual role of PKM2 in diabetic kidney fibrosis and AKI may provide novel insights into therapeutic strategies targeting metabolic and inflammatory pathways. Further studies are needed to clarify the mechanistic interactions between PKM2, fibrosis, and AKI in DKD and explore its potential as a biomarker or treatment target.

This lecture will provide the current state of thinking on what a nonclinical safety package would look like for a successful IND/CTA filing for an AAV therapeutic. In the absence of an internationally aligned regulatory pathway, this lecture will address the nonclinical testing strategies for gene therapies drawing on the 2019 PMDA and 2013 FDA guidances along with data driven and case study approaches. Topics addressed in this lecture will include core aspects to the CTA/IND for a nonclinical safety package including managing unique routes of administration, biodistribution assessment, species selection and design of toxicology studies and how to translate this data into a clinical plan. In addition, specialty areas will be discussed including genomic integration, considerations for pregnancy and children, and vector quality.

東北メディカル・メガバンクは、東日本大震災の後、2012年に設立された。東北メディカル・メガバンク計画では、未来型医療を創出する基盤事業として、一般住民を対象とした前向きコホートである地域住民コホートと、妊婦のリクルートと児の出生から始まる三世代コホートを戦略的に組み合わせて実施している。多くの住民の方々の協力を得て、既に両コホート合わせて15.7万人を超える参加者をリクルートしている。また、これらのコホート基盤に立脚するバイオバンクの整備も進んでいる。当機構のバイオバンクでは、解析センターを併設することによって、多くの研究者や企業に必要な基本的な情報を解析データの形で提供している。多くのユーザーが望むゲノム・オミックス解析を大規模に実施して、有限な生体試料の枯渇を防ぐとともに、一般の研究室では実施することが難しい先進的なビッグデータを迅速に提供することを心がけている。私たちは、このようなバイオバンクのことを複合バイオバンクと呼んでいる。特に、私たちは本計画への参加者10万人の全ゲノム解析を、産官学の協力を通して実施完了した。また、8万人を超えるメタボローム解析も実施している。これら成果は、我が国における未来型ゲノム創薬の基盤を作るものであり、未来型個別化予防・医療にも大きく貢献するものである。私たちはこの成果を活かして、遺伝的リスクを参加者へ還元するパイロット事業も実施している。私たちは、東北メディカル・メガバンク計画の推進を通して、多くの学術研究や創薬開発の支援に取り組みたいと願っている。また、本計画の成果から、多くの疾患の罹患リスクが予知できるようになり、その成果を活かして個別化ヘルスケア社会が実現できることを期待している。私たちは、遠からず、遺伝情報と環境要因情報を活用した未来の医療が実現できるものと確信している。

Malaysia faces significant challenges in toxicology due to industrialization, agricultural practices, environmental pollution, and consumer product safety. Exposure to pesticides, heavy metals, mycotoxins, and emerging pollutants such as microplastics poses risks to both human health and ecosystems. For instance, the illegal chemical waste dumping incident at Sungai Kim Kim, Johor in 2019 garnered national attention due to its impact on thousands of school children, causing symptoms such as nausea, dizziness, shortness of breath, and myokymia due to exposure to toxic chemicals. Additionally, the effects of climate change and urbanization intensify these issues, demanding urgent and sustainable solutions.This presentation will explore the key toxicological concerns in Malaysia and propose strategies to address them. The focus will be on enhancing regulatory frameworks, adopting New Approach Methodologies (NAMs), and applying the One Health approach for a comprehensive risk assessment. Promoting green chemistry, supporting public-private collaborations, and strengthening toxicology education are essential for improving safety and sustainability. Collaboration among multiple stakeholders is essential to developing holistic solutions that protect both human health and the environment in Malaysia.Keywords: toxicology, Malaysia, emerging pollutants, sustainability

In our lab, we have generated a human immune system mouse model by transplanting human peripheral blood mononuclear cells into NSG-B2m mice followed by xenografting diverse human tumors, after which we assessed the role of transforming growth factor-β2 (TGF-β2) in T-cell-mediated anti-tumor immunity. TGF-β is a pleiotropic cytokine that regulates various cellular responses in tumor progression, including proliferation, apoptosis, differentiation, and epithelial to mesenchymal transition. Moreover, TGF-β signaling modulates the tumor microenvironment via mediating angiogenesis, desmoplasia, and immune suppression by affecting microenvironment components such as immune cells, fibroblasts, and extracellular matrix. I am specialized in generating a humanized mouse model for screening immune therapeutics and potential anti-cancer drugs, which has been xenotransplanted with human PBMCs or human immune cells and/or engineered to express human gene products, so as to be utilized for gaining relevant insights in the in vivo context for understanding of human-specific physiology and pathologies. In this talk, I will demonstrate our previous work that inhibition of TGF-β signaling by TGF-β2 antisense oligonucleotide (TASO) enhances the T-cell mediated anti-tumor responses against triple-negative breast cancer, melanoma and pancreastic adenocarcinoma by facilitation of cytotoxic T-cell (CTLs) infiltration and downregulation of regulatory T-cells (Tregs).

Acute fish toxicity (AFT) tests are widely conducted in aquatic risk assessments of chemical compounds worldwide. However, the primary endpoint of in vivo AFT tests—lethal concentration 50 (LC50)—poses a significant challenge in terms of animal welfare. To align with the 3Rs principle (Replacement, Reduction, and Refinement) in animal testing, integrated testing strategies (ITS) have recently been developed for environmental risk assessment. ITS efficiently incorporates multiple sources of data, particularly new approach methodologies (NAMs), to enhance regulatory decision-making. Despite these advancements, an effective ITS framework for evaluating aquatic toxicity remains lacking. Therefore, this study aimed to develop a robust ITS for AFT assessment by integrating in silico, in vitro, and in vivo data. The proposed ITS was established using in silico analysis (OECD QSAR Toolbox 4.6), fish cell line acute toxicity (FCT) tests, and fish embryo acute toxicity (FET) tests, followed by validation of NAMs against AFT data. Our findings revealed strong correlations between AFT results and data obtained from in silico, FCT, and FET tests. Furthermore, we developed a novel ITS for assessing AFT of nonpolar narcotic substances by integrating in silico predictions, FET results, and sublethal effect data. The analysis demonstrated that sublethal effects exhibit strong correlations with both acute and chronic fish toxicity. Based on these results, we conclude that the established ITS provides a reliable approach for predicting the acute and chronic toxicity of nonpolar narcotic substances in fish by leveraging sublethal effects observed in fish embryos.

Thai Society of Toxicology (TST) was founded in 1983. Assoc. Prof. Dr. Songsak Srianujata is the present president, Assoc. Prof. Dr. Chaniphan Butryee as Vice President, and Assoc. Prof. Dr. Monruedee Sukprasansap is Secretary General. From the beginning of TST, we have already 6 presidents. We work closely with allied organizations both private and public organizations, such as Thai FDA and Thai Society of Clinical Toxicology, etc. Recently, the Center for Environmental Safety Assessment (CESA) is established in TST and aims to provide services to public and private. The present challenges of Toxicology in Thailand can be grouped into; 1) Drug safety, 2) Natural poisoning, 3) Food safety, 4) Environmental safety, and 5) Cancer.The challenges and roles of TST on these issues will be presented in more detail. TST has been recognized and collaborated with various public and private sectors to make situation safer and pleasant places to live.

The Japanese Society of Toxicology (JSOT) was established in 1981 as a result of the merge of two toxicology research groups. The mission of the JSOT is to: (1) hold annual meetings, (2) publish journals, (3) educate and certify toxicologists, (4) conduct scientific and public outreach activities, and (5) conduct other programs deemed necessary to support the above mission. This mission is carried out by five permanent committees, and has recently focused on joint programs with relevant external societies. As for international activities, in addition to supporting IUTOX and ASIATOX, JSOT holds joint symposia with SOT and KSOT at the annual meetings. The qualification examination for certified toxicologists, which has a history of nearly 30 years, is available in English. Toward a more diverse society, JSOT has begun to consider systems for active participation of diverse personnel and new information sharing systems using the latest IT communication tools. On the other hand, as an important toxicological issue, the development of new approach methodology (NAM) considering animal welfare and the development of advanced mechanistic analysis methods are becoming increasingly important issues in the toxicological field. Next-generation risk assessment (NGRA) using NAM in Japan is still in its initial stage, but further technological development is necessary for the full-scale regulatory use. The exchange of information and opinions on the status of toxicology in each country like this symposium will play an important role in the development of toxicology in the future.

近年、条件付き早期承認制度など患者の治療選択の幅を広げる新薬等の早期承認を進める制度が運用される中で、市販後の安全対策は一層重要性を増している。医薬品等が承認されるまでに得られる情報は限定的であり、市販後には、製造販売業者や医療機関から報告される副作用・不具合・感染症に関する報告、承認条件として製造販売業者により実施される市販後調査や製造販売後臨床試験に関する情報、文献等による安全性情報など、様々な情報がPMDAに報告される。PMDAにおいては、これらを一元的に整理、評価し、添付文書の改訂や、ときにはブルーレター（安全性速報）の発出等、安全対策につなげている。また、開発から市販後に至るまでに常にリスクを適正に管理するため、医薬品ごとに医薬品リスク管理計画（RMP）を定め、医薬品の安全性確保を図っている。これらに加えて、PMDAにおいては、安全対策業務の一層の質の向上と高度化のため、MID-NET^®やレセプト情報・特定健診等情報データベース（NDB）等のリアルワールドデータ（RWD）（注）を活用した薬剤疫学調査に基づく安全性評価の推進を図っている。更に、本年1月に公表された厚生労働省の厚生科学審議会医薬品医療機器制度部会の取りまとめにおいては、RWDの安全対策への利活用の明確化を図るため、RWDのみによる再審査または使用成績評価の申請が可能であることを明確にすることが盛り込まれている。本講演では、我が国における市販後安全対策制度と、近年より重要性が増しているRWDの活用について、実際の事例も含めて紹介する。（注）実臨床の環境において収集された、患者の実際の健康状態や医療情報、治療経過等の安全性・有効性の評価に活用できる電子的データ。

新医薬品の承認時点においては、安全性に関する情報は限られており、製造販売後の安全性情報の収集が重要である。製造販売後の医薬品安全性監視の基本的な考え方やその方法は医薬品規制調和国際会議 (ICH) が策定したガイドラインに定められており、ICH E2D ガイドラインでは、医薬品の副作用は「医薬品に対する有害で意図しない反応」と定義されている。また、E2E ガイドラインでは、製造販売後に情報収集が必要な安全性上の懸念等を要約した「安全性検討事項」の考え方や、その情報収集の方法を含む「医薬品安全性監視計画」の考え方及び具体的な方法が取り纏められている。本邦ではこれらのガイドラインの考え方をもとに、医薬品ごとに安全性検討事項を設定し、製造販売後に情報収集が必要な懸念をリサーチ・クエスチョンとして明確化した上で、科学的に適切な方法に基づき、製造販売後の安全性監視活動が実施されている。 日常診療等において集積された医療情報（リアルワールドデータ：RWD）を活用する調査は、医薬品の製造販売後の調査及び試験の実施の基準に関する省令において、医療情報データベースを用いて実施される製造販売後データベース調査に分類される。当該調査の実施については、医薬品医療機器総合機構（PMDA）は通知等を発出するとともに、自ら実施した薬剤疫学調査の事例を公表することで、その推進を図っている。 一方で、規制当局へ提出する製造販売後の医薬品安全性評価のうち、RWDを活用する調査に関しては国際的に調和された規制はなく、薬事申請における効率性の向上が求められている。そこで、ICHにおいて新たなガイドラインを作成するM14 専門家作業部会が設立され、薬剤疫学調査を実施する際の考え方が整理されつつある。本講演では、製造販売後における医薬品安全性評価におけるRWDの活用に関する規制について、本邦及び国際整合性の観点から紹介する。

近年、リアルワールドデータ（RWD）の活用が進み、安全性評価においてもその重要性が高まっている。日本では2000年代から特に民間企業が中心となり、医療データベースの整備が進められてきた。診療報酬明細書（レセプトデータ）、DPC調査データ、電子カルテ、PRO（Patient Reported Outcome）、日々の活動量データなど、多様な情報が蓄積され、さまざまな目的で利活用が進んでいる。特に近年は、医薬品や医療機器の安全性評価においてもRWDの重要性が認識され、エビデンス創出の手段として期待が高まっている。しかし、RWDを適切に活用するには、その特性を正しく理解することが不可欠である。データの種類や提供元、構造の違いなどがあり、それぞれの背景を正しく理解せずに活用すると、真逆の結果につながる可能性もあり、適切な活用のための視点を持つことが重要である。また、適切な活用を進めるためには、専門知識を持つ人材の育成も欠かせない。RWDの活用が期待される一方で、治験等のデータとは異なる特性を持ち、バイアスや欠損、標準化の課題など、取扱いに注意が必要な点も多い。このような課題を踏まえ、安全性評価を含むデータ活用のさらなる発展に向けて、新たな取り組みとして「RWDと前向き情報収集を組み合わせたデータ活用」の可能性が注目されている。この取り組みでは、RWDの網羅性と、特定の課題にフォーカスしたデータ収集を組み合わせることで、より実践的なエビデンスの創出を目指している。本講演では、RWDの適切な取扱いについての視点を共有し、安全性評価を含めた幅広いデータ活用のさらなる発展について考察する。

電子カルテの普及や保険請求データの電子化に加え、関連法規・ガイドラインが整備された結果、近年、リアルワールドデータを活用した医薬品の安全性評価は急速に進展している。日本大学医学部臨床試験研究センターでは、日本大学附属3病院の電子カルテ情報を抽出した「日本大学臨床データベース(Nihon University School of Medicine's Clinical Data Warehouse: NUSM's CDW)」を2004年に構築し、20年以上にわたって運用している。2025年時点で、NUSM's CDWには270万人以上の患者に関する詳細な診療情報(基本情報、診断情報、処方薬情報、検査情報、バイタル情報など)が蓄積されている。NUSM's CDWのデータはすべて匿名化されているため、個人情報の保護に配慮した上で研究に利用することが可能である。本シンポジウムでは、NUSM's CDWの特徴や医薬品の安全性評価の研究例、今後の研究の展望について紹介する。

近年、我が国では創薬力向上は喫緊の課題であり、特に医薬品の安全性評価は重要である。非臨床試験から臨床試験、市販後調査に至るまで詳細に解析し、今後の医薬品開発に役立てる必要がある。リアルワールドデータに関しては、診療データベースや公的データベース、FDAに自発報告された有害事象のデータベースFAERSなどがあり、安全性情報の解析が可能である。また、近年、非臨床における安全性評価の革新が求められており、ヒト細胞やAI/MLなど新たな科学技術の活用が期待されている。我々は効率的な医薬品開発や被験者の安全性確保の観点から、市販後のデータを解析して課題を抽出後、非臨床試験において安全性を適切に予測する手法の開発と標準化に取組むことにより、両者の橋渡しを研究を進めている。具体的には、医薬品の開発中止や市場撤退の主な原因である薬剤性の心毒性や肝障害（DILI）等に焦点を当てて診療データベースやFAERSなどのリアルワールドデータを解析し、ヒト細胞による評価法の有用性を検証した。その結果、リアルワールドデータから不整脈や心不全リスク、DILIリスクの高い医薬品を抽出してヒト細胞による検証を行ったところ、一定の予測性が得られることを明らかにした。さらに、患者データや患者由来の細胞などを用いることにより、患者の背景や年齢差などを考慮できるのか検討している。本シンポジウムでは、リアルワールドデータとヒト細胞を用いた非臨床評価の橋渡しに関する取り組みについて紹介し、創薬力向上に向けた課題について議論したい。

MPS is one of the advanced in vitro models that have attracted attention from various industries such as pharmaceuticals. We have been studying the requirements for the industrial implementation of MPS as a novel test method from the viewpoint of regulatory sciences. In the first half of the presentation, the “Specifications” of devices and cells, which are the components of MPS, are defined by setting the Context of Use (CoU) of MPS, and how the “Point of Consideration” to meet the “Specifications” are derived. Based on the results of our recent studies, examples of “Point of Consideration” for good cell culture in MPS, such as cell adhesion and oxygen supply¹⁾, will be presented. In the latter half of the presentation, I will discuss the formation of a forum for discussion necessary for regulatory acceptance of the test methods developed based on the CoU. The Japan MPS Initiative²⁾ was launched to formulate domestic discussions. More than 350 participants engaged in heated discussions at the second meeting held in January 2025. Globally, the International MPS Society is playing a central role in promoting discussion, and I am the chair of the Asia-Pacific regional chapter. ³⁾ Seven countries in the Asia-Pacific region have already participated in this chpater. This presentation will introduce some of the activities. I hope that this symposium will provide an opportunity for further discussion development in Asia-Pacific region.1) Enhanced Functionality of Human Hepatocytes using the Oxygen Permeable Culture Plate for Optimized Oxygen Supply in Co-culture Systems with Culture Inserts. Shoka Takebayashi, Kureha Suzuki et al. AATEX, 29, 64-74, 2024.2) https://www.nihs.go.jp/phar/lab/MPS-kyogikai_HP/index1_en.html3) https://impss.org/asia-pacific-regional-chapter/

Since the European Union (EU) announced animal testing ban in 2013, all animal experiments related to cosmetics have been prohibited. Here, we investigated if ex vivo live porcine skin model can be employed to study the safety of chemicals. Ex vivo live porcine skin maintained the viability up to 1 week after the preparation and the histological structure was the most similar to human skin among other experimental animals. Ex vivo live porcine skin was examined for the applicability to skin corrosion and irritation tests based on cell viability and skin barrier function. Importantly, ex vivo live skin can capture various aspects of skin corrosion and irritation, encompassing the damages on stratum corneum, cell death and inflammatory changes. It also successfully identified skin corrosives and irritants with the excellent accuracy over 80%. We also examined whether ex vivo model can be employed to evaluate the skin absorption of mixtures. While conventional dermatomed skin tissues cannot address the skin irritancy of the co-existing chemicals, which is an important factor in enhancing the skin absorption, ex vivo model can correctly simulate the skin irritation condition and the increased skin absorption of the chemical could be observed. We also applied ex vivo model to repeated treatment scenario, of which point is difficult to simulate in other in vitro test methods. Ex vivo model could show the wound-healing process, which is a key factor for the reversibility of the toxicity. Collectively, we demonstrated that the ex vivo live full-thickness porcine skin model can be an excellent alternative to animal experiments for the skin safety of chemicals.Funding: This study was funded by the Health Technology R&D Project, Ministry of Health and Welfare, Republic of Korea (Grant number: RS-2024-00344565).

髄腔内に投与する核酸医薬品は、必要な治療部位に高濃度の核酸を直接届けることができるため、少ない投与量で長期間にわたり効果が期待でき、副作用のリスクも軽減され、中枢神経系の疾患に対する治療において大きな可能性を秘めている。現在、髄腔内投与の核酸医薬品として、ヌシネルセン、トフェルセンの2品目が承認されている。薬理試験や毒性試験において、げっ歯類の脳室内あるいは髄腔内へ核酸を投与すると、投与直後から、かなりの頻度で自発運動量低下、鎮静や痙攣などの行動異常が起きることが知られている。痙攣はその中でも特に重篤で、認められた場合、十分な安全域が確保できなければその核酸の開発を中断せざるを得ず、核酸医薬品開発の効率が大幅に低下する。特定のイオンチャネルやトランスポーターを阻害するような低分子化合物起因の痙攣と異なり、核酸髄腔内投与による痙攣のメカニズムには不明な点が多い。そこで、本シンポジウムでは、我々は核酸髄腔内投与に起因する痙攣のメカニズムをできる限り明らかにしながら、現時点で考え得る最適な痙攣の予測方法と、軽減方法それぞれに関してin vitro試験の観点から紹介し、今後、より安全性の高い、髄腔内投与を指向した核酸医薬品の開発に役立てたい。

The presentation discusses the development and application of Kidney Microphysiological Systems (MPS) for assessing nephrotoxicity, offering an advanced alternative to traditional methods in drug discovery. MPS models replicate human kidney physiology more accurately than conventional 2D cultures and animal models, addressing significant limitations in current nonclinical studies. Key applications include models for acute kidney injury (AKI), drug-induced nephrotoxicity, and ischemia-reperfusion injury.The research highlights the effectiveness of MPS in simulating various pathological conditions and drug regimens, such as comparing different dosing regimens of gentamicin and studying contrast-induced kidney injury. The presentation also explores the use of co-culture systems to study organ cross-talk, exemplified by a hemolytic uremic syndrome model.MPS technology holds the potential to revolutionize nephrotoxicity testing by reducing reliance on animal models and improving human response predictions. Future developments include refining nephron-on-a-chip models that integrate glomerular and tubular functions, further enhancing the study of kidney diseases and drug responses.

"Organoid," referring to 3D mini-organs produced from human tissues or stem cells, exhibits similarities in terms of cells, structures, and functions with actual organs. Organoids can replicate various organs, including the liver, intestines, brain, skin, and even tumors, achieving a high degree of similarity to the human body. By utilizing organoids, it is anticipated that the efficiency of drug development can be significantly improved by conducting accurate toxicity and efficacy evaluations in preclinical trials. Furthermore, organoids have recently found applications in validating the effectiveness of cosmetics and dietary supplements, expanding their influence across various industries. Additionally, when organoids are transplanted into damaged areas, they have a direct regenerative effect, garnering significant attention as regenerative therapies. In this lecture, we aim to cover the entire spectrum of organoids, from their fundamentals to their commercialization, given their increasing importance in various fields.

先天性甲状腺機能低下症で知られるように、甲状腺ホルモンは中枢神経系の発達に必須のホルモンの一つである。甲状腺ホルモンは神経細胞の新生・成長、神経回路の構築に必要な遺伝子発現調節の一端を担い、不足により不可逆的な神経発達障害を引き起こす。そのため、先天性甲状腺機能低下症は早期診断、早期治療が重要である。我が国では、1979年に新生児マススクリーニングの対象となり、以降は重度の先天性甲状腺機能低下症例の発見は容易になった。一方、潜在性先天性甲状腺機能低下症や、甲状腺ホルモン受容体異常（不応症）、トランスポーター異常症といった疾患が存在することが注目されている。我々のグループはそうした動向を踏まえ、甲状腺ホルモンの神経発達への評価を行うために様々なマウスモデルを用いて、行動学的な表現型から作用機序の解明に関する研究を行ってきた。本発表では周産期の軽度の甲状腺機能低下による、成体期における記憶学習能・協調運動能・母性行動等への影響を報告する。これらのモデルマウスは離乳後に甲状腺ホルモン機能を正常化させることにより、発育・成長のキャッチアップや光学顕微鏡レベルでの神経細胞の形態変化も正常化する。しかし成獣でも神経機能異常が継続することから、周産期の甲状腺機能低下症は軽度であったとしても不可逆的な神経発達異常を来すことが明らかとなった。この事実は環境化学物質による周産期甲状腺機能の攪乱の懸念を考慮すべき理由の一つである。また、近年社会的に問題となっている有機フッ素化合物（PFAS）の周産期曝露が甲状腺ホルモン系を攪乱する可能性についての研究成果も概説する。

妊娠母体の甲状腺機能低下と出生児の脳発達との間には明らかな相関が認められており、化学物質の甲状腺機能かく乱に起因する次世代影響が懸念されている。この問題を受けて、2016年頃より関連する毒性ガイドライン試験には甲状腺関連指標の評価が追加された。しかし、これらの指標の変動と次世代影響との連関には不明な点が多く、現時点では十分なリスク管理スキームの構築には至っていない。先天性甲状腺機能低下症の表現型からも、妊娠期～周産期の甲状腺機能低下が児に多様な影響を及ぼすことは既に明らかである。しかし、化学物質曝露により誘導される甲状腺機能低下は一般に軽度であり、必ずしも典型的な甲状腺機能低下状態における表現型と一致しない可能性がある。このため、化学物質リスク評価においては、妊娠期～周産期の軽度な甲状腺機能低下によって誘導される最も鋭敏な児のエンドポイントを明らかにすることが極めて重要である。この点については、2019年に米国HESIが開催したThyroid Hormone Assessment Workshopにおいても同様の課題が指摘されている。我々はこの問題に対し、甲状腺ペルオキシダーゼ阻害剤であるプロピルチオウラシルを用いたマウス甲状腺機能低下モデルを構築し、児の鋭敏なエンドポイントの探索を行った。その結果、最も影響を受けやすいのは脳発達であることが明らかとなった。さらにこの影響は、ガイドライン試験で実施される組織学的解析では検出されず、我々が独自に開発した神経分化マーカープロモーター下でルシフェラーゼを発現するレポーターマウスを用いた解析によって、初めて検出可能であった。本講演では、マウス甲状腺機能低下モデルにおける甲状腺関連指標と児の各エンドポイントとの相関について紹介し、甲状腺機能低下を誘導する化学物質のリスク管理に向けた課題と展望について議論したい。

近年，妊婦の甲状腺ホルモン (TH) の変動と児の知能低下との関連が疫学的に示されたことを受け，化学物質の甲状腺に対する影響が大きな注目を集めている。こうした背景から，2016年頃よりOECDテストガイドラインが相次いで改定され，各種毒性試験の評価項目に血中TH濃度の測定や甲状腺の病理組織学的検査等の指標が追加された。そのため，化学物質の甲状腺影響を適切に評価する上で，これらの指標に関する背景値取得が一段と重要性を増している。一方，一連のガイドライン改定に伴い，飼料中の植物エストロゲン含有量についても適正基準が示された。すなわち，飼料中の含有量をゲニステイン相当量として350 μg/g未満に抑えることが推奨されている。これは主としてエストロゲン作動系に対する影響の検出力向上を図るものと考えられる。しかし，植物エストロゲンには甲状腺ペルオキシダーゼの活性を阻害する等の作用も知られており，本改訂は甲状腺影響の評価にとっても必ずしも無関係ではない。我々は，動物集団や飼料中成分の違いに着目し，これらが実験成績に及ぼし得る影響について調べると共に，背景値の蓄積に努めてきた。本講演では，その様な取り組みの一環として，国内とタイの生育場から入手した雌雄のWistar Hannover GALASラット (日本クレア株式会社) に，通常飼料であるMF飼料と植物エストロゲンの含有量を低減させたNIH-07PLD飼料 (いずれもオリエンタル酵母工業株式会社製) を二世代に亘って与え，甲状腺関連指標を調べた結果を紹介する。実験の結果，飼料の違いが血中TH濃度，甲状腺重量および病理組織学的所見の頻度に及ぼす影響は殆ど認められなかった。一方，動物集団の違いが及ぼす影響については，特に国産ラットの血中T4濃度がタイ産ラットに比べて高く，これらの差はP，F1およびF2と三世代に亘って維持されることが明らかとなった。これらの結果に基づき，特に動物のロット差に起因する背景値の変動についても議論する。

　化学物質の抗甲状腺作用検出を目的として実施される血中ホルモン値測定には、高いコストに加えて測定条件による変動が大きい等の問題がある。我々は抗甲状腺物質のより効率的な検出法を確立するため、ラット28日間反復経口投与毒性試験における各種検索の結果を、血中ホルモン値の変化と比較した。6週齢の雄SDラット（5匹/群）に、甲状腺機能を低下させる5種類の機序（甲状腺ペルオキシダーゼ（TPO）阻害、ヨウ素取込み阻害、脱ヨウ素酵素（DIO）阻害、下垂体TSH産生阻害、肝臓におけるホルモン代謝促進）について計10物質を、複数用量で28日間反復経口投与した。血清T3・T4・TSH値測定、血液学的/血清生化学検査、器官重量および病理組織学的/免疫組織化学的検索を実施した。　その結果、TSH産生阻害を除く4種の機序については、甲状腺における病理所見（濾胞上皮細胞肥大）が血中ホルモン値の変動よりも低用量から有意に増加し、最も鋭敏な指標であることが明らかとなった。免疫組織化学的検索では、甲状腺T3/T4の染色性はTPO阻害剤およびヨウ素取込み阻害剤により著しく低下し、甲状腺に対する直接阻害作用を反映していた。甲状腺Na/I共輸送体（NIS）発現はヨウ素取込み阻害剤により増加したが、対照的にDIO阻害剤では低下し、両者の鑑別に有用であった。また、肝UGT1A6発現は、間接阻害作用を特徴とするホルモン代謝促進剤により明らかな増加を示した。TSH産生阻害作用は、免疫染色における下垂体TSH産生細胞の減少として検出可能であった。　以上の結果から、甲状腺の病理組織学的検索は抗甲状腺物質の検出において優れた指標であること、免疫組織化学的解析を併用することでその機序を推定可能であることが明らかとなった。本手法は化学物質の安全性評価で汎用される28日間反復経口投与毒性試験において容易に実施可能であり、血中ホルモン値測定と併用することで、評価の迅速化・精緻化につながると期待される。

本シンポジウムは、日本毒性学会学術小委員会が企画する、トキシコロジストの育成や価値最大化に関する話題を提供する継続的プログラムとして開催されるものである。企業の研究所を活動の場とするトキシコロジストには、博士号を取得してから就職する方だけでなく、就職後に企業にて研究活動を行いながら博士号を取得する研究者が多くいる。これらの者の多くは業務として会社の支援を受けながら、あるいは会社の業務とは別に社会人大学院生として学究の期間を過ごしているものと思われる。学術小委員会では、同様のシンポジウムを49回大会においても行い、その際に、毒性関連企業における社員の資格取得状況、採用と博士号、企業でのキャリアにおける博士号取得ななどに関するアンケートを実施している。本セッションでは、アンケート結果を簡単に紹介したのち、本シンポジウムの企画内容について紹介する。

博士号とは，博士論文の審査に合格した者に授与される最上位の学位称号である。その分野における高度な専門知識と研究能力を持つことを示す客観的なパスポートであり，特に海外での価値が高いと感じる。しかしながら，社会人が博士号を取得するためには，まずは受け入れてくれる大学院を見出さなければならない。さらに，業務や家庭との両立，経済的負担，研究の進捗や成果に対するプレッシャーが重くのしかかってくるため，博士号取得を躊躇するケースも多いのではないかと思う。本発表では，安全性研究者として企業で働きながら，社会人大学生として博士号を取得した私自身の経験を，その当時感じたことと共に紹介する。私は2005年4月より約14年間，安全性研究に携わってきた。2019年4月から3年間，上司からの薦めを受けて，社会人大学生として静岡県立大学薬学部 衛生分子毒性学分野に在籍し，吉成先生の指導の下，博士号を取得した。その過程では，業務や家庭との両立に加え，研究成果への見通しの甘さやコロナ禍の影響など，様々なハードルがあり，今振り返っても厳しい状況だったが，吉成先生や同僚の指導・協力を受けながら，基礎研究に真剣に取り組んで学位を取得できたことは，自分にとって何物にも代えがたい貴重な経験であった。この経験や博士号の取得自体が，その後の研究業務の深化やプロモーション等のキャリア形成に大きく影響していると感じている。本発表の中では，私が博士号を取得して良かったこと／大変だったことについてもお話したい。

修士課程を修了後に製薬会社に入社し，安全性研究部に配属され，所属が変わることなく現在に至る。入社4年目から博士課程に入学し，会社員として業務をしながら大学院生として研究に取り組んだ。社内で実施した研究内容を論文化し学位を取得される方が多い中，所属する研究室のテーマについて研究を進めた。その間，２度の出産というライフイベントを経験し3年間の休学で研究が中断されたが，復職後に大学への9カ月間の派遣を経てPhDを取得までの10年間に様々なことを学んだ。当日はその経験を紹介することで，今後学位取得を目指す方々の参考になればと考えている。

研究者として、博士号取得は自身のキャリアの可能性を広げる上で、有効な1つの選択肢であると考える。演者は2017年に獣医病理系の大学を卒業後、協和キリンに入社し、2018年から出身研究室の社会人大学院に入学した。会社ではプロジェクトトキシコロジストとしての安全性評価の業務や薬効／毒性病理評価に従事する傍ら、大学院では会社の業務とは異なるテーマでの毒性病理研究を行い、2023年に博士号を取得した。また、博士号を取得するまでに、子育ての開始や認定トキシコロジスト取得への挑戦など、ワーク・ライフ両面での変化もあった。本シンポジウムでは、博士号取得を通じて得た知見や経験、苦労を含めた自身の体験談を紹介したい。

私は博士後期課程を修了、博士号取得後に非臨床試験CROに就職した。現在は国内及び海外委託者の試験責任者として働いている。結果として博士号取得は私にとって良い選択であったと実感している。大学ではDrug Delivery System(DDS)を用いた薬物治療について研究し、学会発表や論文執筆を行った。研究室においては研究課題の発掘や他学部の研究者とのコラボレーションなどを行い、昼夜問わず研究に取り組んだ。研究を通じて多くの課題に直面し、仮説通りに進まない研究の難しさや再現性ある結果を得た時に達成感を感じることができた。博士課程進学後は就職活動や学費についての不安があった。しかし、大学の博士課程進学者向けの教育支援プログラムを活用し、インターンシップや就職活動支援、給付型奨学金などを受けることで、それらの不安を解消することができた。博士号を取得するためには社会人博士という選択肢もあるが、博士号を取得してから就職するメリットの一つとして研究に集中できるということがある。就職の際には様々な進路を考えたが、元々「医薬品の開発に貢献したい」という夢があり、インターンシップでお世話になった新日本科学への就職を選択した。大学院の研究内容が就職後に直結する可能性は低いため、就活中は複雑な思いもあったが、博士号取得を通して学んだことは就職後も活かされていると考えている。例えば、試験責任者の業務では非臨床試験データを考察し、委託者や社内で協議しながら報告書を作成しており、大学院時代に論文作成やプレゼン発表を経験していたことが役に立っている。また、博士号を取得したこと自体が業務の幅を広げる可能性があり、社内資格の取得可能時期や海外委託者からの試験責任者の選定条件などにおいて有利になった。本発表では博士号取得後に就職した経験を通して、課程博士号を取得してよかったことについて紹介する。

医薬品開発において、生殖発生毒性（DART; Developmental and Reproductive Toxicity）試験としては受胎能及び初期胚発生に関する試験（FEED試験）、胚・胎児発生に関する試験（EFD試験）、出生前及び出生後の発生並びに母体の機能に関する試験（PPND試験）の 3種類のin vivo試験が一般に実施される。 DART評価に関するICH S5(R3)ガイドラインでは、科学的根拠の重み付け（WoE; Weight-of-Evidence）について、in vivo EFD試験実施の延期を含む総合的試験戦略の一環として言及されているほか、リスク評価の原則として考え方が触れられており、動物実験代替法の利用も補助的に利用できるものとされている。HESI（Health and Environmental Sciences Institute）は、世界中の産官学の科学者が協力し、世界的な健康と環境に係る課題を共同で把握・解決することを目的とした非営利団体である。中でもHESI DARTはDARTに関する科学を発展させ、健康リスク評価における毒性試験データの適切な利用に関する科学界のコンセンサスを形成することを目的とした委員会であり、複数のワーキンググループから構成される。Alternatives to NHP Working Groupは近年課題となった実験動物としてのNHPの不足を受けて発足したWGであり、受胎能への影響評価に用いられる性成熟個体の使用を最小限にする方策の検討を行った。医薬品のDART試験におけるNHPの使用実態調査や、ワークショップを開催してNHPのみが適切な動物種である場合のDART評価に関する議論を行い、WoEアプローチに基づくNHPを用いる試験の省略可能性についても検討されている。議論内容はホワイトペーパーにまとめ、論文化作業を進めている。本発表では、HESI DART NHPs WGの活動を紹介するとともに、DART評価におけるWoEアプローチの考え方を解説する。

ICH S1Bガイドラインの補遺（S1B（R1）ガイドライン）は、証拠の重み付け（WoE）評価に基づく統合的アプローチにより、ラット2年間がん原性試験の実施の要否を検討可能とするガイドラインである。2022年8月4日にS1B（R1）ガイドラインがICH公式ホームページに公開（Step 4）されて以降、EC（Europe）、FDA（United States）、Health Canada（Canada）、Swissmedic（Switzerland）、MHLW/PMDA（日本）を含む17地域のうち10地域において、S1B（R1）ガイドラインが実装化されている。本邦では、2023年3月10日にS1B（R1）ガイドラインの改定内容を含む「医薬品のがん原性試験に関するガイドラインの改正について」（薬生審査発第1号）が発出された（Step 5）。また、同じ日の2023年3月10日に、PMDAにおいて「医薬品安全性相談（ICH S1B（R1）ガイドラインに係る相談）」（S1B（R1）相談）が新設され、S1B（R1）ガイドラインを用いた2年間ラットがん原性試験の免除に係る相談を受け付けるための体制が整えられた。一方、ICH S1B（R1）ガイドラインでは、製造販売承認申請を行う規制当局ごとに、協議することが定められているため、規制当局間で判断結果が異なる場合がある。そうした背景から、2024年3月12日に、S1B（R1）ガイドラインの適切な運用を目的に、各国の判断状況を共有及び情報交換を行うことに加え、WoE評価の不一致が生じる要因を特定し、一貫性を高めるための方策やQ&Aで取り組むべき課題を検討するために、IWGが結成された。本講演では、IWGの活動状況や本邦でのS1B（R1）相談の実施状況を報告するとともに、これまでのS1B（R1）相談の実施経験から得られた、WoE評価に基づく統合的アプローチを用いたがん原性評価の留意事項について、規制当局側の視点を述べたい。

ICH S1B(R1)ガイドラインは2022年8月にStep 4達成後，各規制当局で続々とStep 5に到達し，現在ではICH加盟国の多くで2年間ラットがん原性試験（2年間ラット試験）によらないがん原性評価［Weight of Evidence（WoE）アプローチ］が可能となった。WoEアプローチでは2年間ラット試験がヒト発がん性リスク評価において実施の価値を付与しないと考えられる場合はその実施は不要になるが，申請を予定している規制当局と考察結果について合意する必要がある。また，複数当局と相談する場合に，規制当局間の判断の不一致が生じることは以前より指摘されてきた懸念事項である。FDAは2年間ラット試験実施の価値が低いとするWoE評価結果を昨年9月までに37件受領し，うち20件に同意したことを公表しているが，他規制当局は相談結果を公表しておらず，当局間の判断の整合性については不明である。また，企業が自主的に2年間ラット試験を実施する場合には，規制当局はその実施理由などについては申請まで把握できない。以上のような背景から，製薬協基礎研究部会タスクフォース1は欧州製薬団体連合会（EFPIA），IQコンソーシアム（IQ DruSafe）と共同でアンケートを行い，加盟企業のWoEアプローチによる規制当局との議論の経験，問題点を調査した。本シンポジウムではアンケート結果を共有し，当局相談にかかる期間，判断の整合性，企業側で感じている問題点などについて紹介する。

小児医薬品開発の非臨床試験ガイドライン（ICH-S11）は、2020年にステップ5に到達して久しい。成長・発達段階にある小児を対象とした医薬品開発には、特別な配慮が必要である。成人を対象とした医薬品開発と比較して、小児用医薬品の開発では、それぞれの年齢に対応したプロトコル、治験薬の用量、剤型など、考慮すべき事項が飛躍的に増加する。そのため、承認申請に至るまでには多くの課題を解決する必要がある。小児医薬品開発の非臨床試験においては、幼若動物試験（JAS）が重要な情報を得る手段であるが、ヒトと実験動物の発達段階は差異があることを考慮した選択が必要となる。S11ガイドラインの作成過程では、「追加の非臨床安全性試験に関する考慮事項」に関する議論に多くの時間が費やされた。本ガイドラインは主としてJASの実施を念頭に置いているが、治験薬の開発状況によってはJASが不要となる場合もある。すなわち、治験薬の対象患者の年齢、非臨床試験および臨床試験における既知の有害事象の有無、さらには既存データの量や種類を総合的に考慮し、JASの必要性を判断することが求められる。その判断手法として、「ウエイト・オブ・エビデンス（WoE）アプローチ」が示されている。S11におけるWoEアプローチは、複数の非臨床および臨床データを総合的に検討し、臨床試験でのリスク評価に重要な影響を与える要素を重視することで、追加の非臨床試験の必要性を判断する。たとえば、薬理作用が明確であり、成人における長期毒性や発達毒性のリスクが確認されていない場合、小児向けに新たな動物試験を実施しなくても、その安全性が担保されるケースがある。WoEは、科学的根拠に基づいた柔軟な意思決定を可能にし、効率的な医薬品開発を促進する手法であるが、その運用には、非臨床試験から臨床試験までを俯瞰的に考察することが求められる。本発表では、WoEに関するセッションの導入として、ICH-S11における議論の概要を紹介する。

幼若動物を用いた毒性試験（以下、幼若動物試験）は小児の安全性をサポートするうえで有益と判断された場合に実施される。実施の有無はあらゆる既存情報を収集したうえで、Weight-of-Evidence（WoE）アプローチにより判断される。⼩児⽤医薬品開発の⾮臨床安全性試験ガイドライン（ICH S11，以下，ガイドライン）では、WoEアプローチで使用されうる要素とその重要性や考慮事項が記載されているが、それらの情報を実施有無の判断につなげていく方法の詳細は記載されていない。また、WoEアプローチで使⽤される情報は医薬品の適用や開発時期によってケースバイケースであることから、アプローチの適用による実施判断に悩む場合が想定される。日本製薬工業協会基礎研究部会・KT2 では、製薬協加盟各社に対し、ガイドライン発出後のWoEアプローチの実施状況、アプローチにより判断された幼若動物試験の要否に対する規制当局の反応やWoEアプローチに対する意見等を求めるアンケートを実施した。本シンポジウムでは、アンケート結果を紹介するとともに、それらから導かれるWoEアプローチの課題についても触れてみたい。

DS-3201b（バレメトスタットトシル酸塩）は、enhancer of zeste homolog（EZH）2及びEZH1 dual阻害剤であり、再発又は難治性の成人T細胞白血病リンパ腫（ATLL）及び末梢性T細胞リンパ腫（PTCL）の治療薬として本邦で承認されている。DS-3201bのラット13週間反復経口投与毒性試験（用量：20、60、及び200 mg/kg／日）において、20 mg/kg／日で胸腺原発のT細胞リンパ腫が確認された。このリンパ腫の発生機序を調べた結果、リンパ腫を発症した動物の胸腺では、CD3陽性T細胞、CD8陽性T細胞、CD8及びT-cell receptor αβ（αβ）陽性T細胞、CD4及びCD8共陽性（DP）T細胞、又はCD4及びCD8共陰性（DN）T細胞の増加が認められた。また遺伝子発現解析では、リンパ腫はモノクローナル性増殖ではないことが確認され、DP T細胞におけるMYC、DN T細胞、制御性T細胞、及びインターフェロン関連遺伝子の変動がリンパ腫発症に関係していると考えられた。次に、DS-3201bによるリンパ腫が、胸腺が退縮した加齢ラットでも発症するか検討するため、DS-3201bを10及び20 mg/kg／日の用量で加齢ラット（投与開始時55週齢）に3ヵ月間反復経口投与した。その結果、加齢ラットではリンパ腫は認められなかった。以上の検討により、DS-3201bのT細胞リンパ腫は胸腺が退縮した成人ATLL又はPTCL患者で発症する可能性が低いという知見を得ることができ、詳細な毒性機序検討を含むフォワードトランスレーショナル研究がDS-3201bの開発をサポートすることができた。

　医薬品開発において非臨床毒性試験で認められた毒性所見のヒトへの外挿性を検討することは、医薬品候補の開発可能性を見極める上で非常に重要である。その際、薬効標的への活性種差、血液パラメータや生体内で認められる種々の病理組織学的変化などの情報を総合的に検討し、生体内で生じている変化を踏まえて毒性の発現機序を検討することとなるが、その機序検討は難解であることは少なくない。本演題では、動物種間で異なる毒性の表現型を示し、ヒトへの外挿性を検討した事例を紹介する。　非がん領域を適応症とした低分子化合物Xのサル2週間反復経口投与毒性試験では、ヒト予測有効量付近から赤血球、血小板などの血球減少、骨髄における血球の貪食像の増加などが認められた。一方、ラットにおいてはこれらの毒性変化は認められなかった。サルでの毒性がヒト予想有効量付近で認められたことから、毒性の発現機序を解明してヒトへの外挿性を検討することは、化合物Xを医薬品として開発する上で必須要件となった。今回、我々はサルとラットの毒性発現種差の可能性を考慮した化合物Xの毒性発現機序を検討し、ヒトへの外挿性について評価した。その詳細を報告する。

医薬品開発において、臨床における安全性リスクを評価するため、非臨床安全性評価は極めて重要である。しかし、現在の非臨床安全性評価による臨床における副作用の予測精度は十分とは言えず、臨床試験で初めて予期せぬ副作用が認められ、医薬品開発が中止となるケースも少なくない。このような臨床試験で初めて副作用が顕在化した薬剤を用いたリバーストランスレーショナルリサーチは、副作用機序の解明だけではなく、新規評価系の構築や評価ストラテジーの改良などを通して、ヒトにおける安全性リスクの予測精度の向上が期待できる。抗体医薬品で認められる副作用として、サイトカイン放出症候群（CRS）が知られている。CRSは抗体医薬品に対する生体反応によって過剰なサイトカインが放出されることで発症する。発熱、頭痛、悪寒などの比較的軽度な症状から、頻脈、低血圧、呼吸困難など重篤な症状まで引き起こされることがある。重篤なCRSの実例として、CD28スーパーアゴニスト抗体TGN1412の臨床試験で認められた多臓器不全が良く知られているが、TGN1412のサルを用いたin vivo毒性試験においては明確なサイトカイン産生は確認されていなかった。この原因としてサル－ヒト間の動物種差が知られている。そのため、ヒトにおけるサイトカイン遊離作用を予測する様々な評価系がヒト血球細胞を用いて検討・開発されてきた。しかし、当社の抗体医薬品において、ヒト血球細胞を用いた評価では明確なサイトカイン産生が確認されなかったにもかかわらず、Phase I臨床試験で重篤なCRSが発生し、開発が中止された事例がある。本発表では、臨床試験でCRSが認められた当社の抗体医薬品を用いたリバーストランスレーショナルリサーチにより、副作用の機序解明やサイトカイン遊離作用評価系を再構築した結果について紹介する。

医薬品の開発において、臨床のデータを起点としたリバーストランスレーショナルリサーチ（rTR）の機会は、フォワードトランスレーショナルリサーチに比べて少ない。しかし、ひとたびrTRによってデータが得られると、非臨床部門及び臨床部門のメンバー双方が深い知見を得ることができ、次の判断をより洗練させることのできる貴重な機会となる。本講演では、アステラス製薬で経験したrTRの事例を紹介する。この講演を通じ、rTRで得られた知見をどのように次に活かしたらよいか考える一助となれば幸いである。

薬物誘発性肝障害の発症には、多くの場合、薬物代謝酵素によって生成される反応性代謝物が関与している。近年、四塩化炭素 (CCl₄) やアセトアミノフェン (APAP) などによる肝障害において、反応性代謝物の生成に続いて鉄依存性の細胞死であるフェロトーシスが引き起こされることが明らかにされている。このことから、肝臓内の鉄レベルの制御は、薬物誘導性肝障害の感受性を左右する鍵となり得る。当研究室では、APAPを投与したマウスの肝臓において、ヘムの前駆体であるプロトポルフィリンIX (PpIX)量が低下することを見出し、PpIX生合成の前駆体である5-アミノレブリン酸の投与により鉄レベルが減少し、肝障害を軽減できることを明らかにした。また、薬物加水分解酵素として知られているアリルアセタミドデアセチラーゼ（AADAC）が、Fe²⁺からFe³⁺への酸化反応を触媒するセルロプラスミンと相互作用し、細胞内鉄レベルを抑制することも明らかにし、AadacノックアウトマウスにCCl₄やAPAPを投与すると、野生型マウスに比べて血漿中ALTおよびASTレベルの上昇が顕著であった。さらに、APAPと同じくキノンイミン体の反応性代謝物が毒性発現に関与することが知られているアモジアキンを投与した際にも、Aadacノックアウトマウスでは野生型マウスに比べて高い血漿中ALT値を示す個体の割合が増加することを明らかにしている。このように多くのケースで、反応性代謝物は鉄レベルを上昇させ、フェロトーシスを介して肝障害を発症し、その程度には鉄代謝を制御する因子が関与すると考えられる。本発表では、薬物誘導性肝障害の新たな理解に向けて、反応性代謝物の生成と鉄レベルを制御する因子を中心として議論する。

薬物療法では副作用として薬物誘発性腎障害（drug induced kidney injury, DIKI）を引き起こす可能性があり、その発症は患者の健康状態さらには生命予後に影響を及ぼす。DIKIは近位尿細管に好発し、その理由の一つとして構成細胞である近位尿細管上皮細胞（RPTEC）には薬物の細胞内濃縮に働く薬物トランスポーターが高く発現していることが挙げられる¹⁾。このため医薬品研究開発においてDIKI評価が必要となり、ヒト予測および動物代替の観点からヒト由来細胞のin vitro系を用いた検討が重要となる。しかし、従来の初代培養系を含むRPTEC細胞株では有機アニオントランスポーターOAT1などの発現量が低く、トランスポーター介在性DIKIの感受性が低い課題があった。我々の研究グループではヒトRPTECの三次元培養スフェロイド（3D-RPTEC）においてOAT1など種々の薬物トランスポーター発現量が上昇することを見出し²⁾、細胞内ATP量の変化を指標とすることで精度の高いDIKI評価が可能となることを示した³⁾。さらに本評価系の頑強性を調べるため国内プレバリデーション試験を行ったところ、良好な施設間再現性が得られた。また、ミトコンドリアなどオルガネラの機能変化を追跡可能な画像診断に着目し、腎障害評価における有用性について検討を行っている。加えて、一般化合物による腎障害予測系としての有用性を調べるため、紅麹サプリメント汚染物質プベルル酸によるRPTEC毒性についても検討を行っている。1) Arakawa et al., Drug Metab Pharmacokint, 61:101056 (2025).2) Ishiguto et al., Drug Metab Dispos, 51:1177-87 (2023).3) Arakawa et al., J Pharm Sci, 113:3255-64 (2024).

医薬品開発において、開発化合物のヒトにおける有効性および安全性を推定することは極めて重要な課題である。有効性および安全性の in vivo 評価モデルは主に実験動物が用いられるため、非臨床段階から臨床へと開発ステージを進める際には種差を考慮する必要がある。そのため、組織由来試料を用いた in vitro 試験系には、こうした種差の克服に対する大きな期待が寄せられている。下痢や嘔吐などの消化管障害は、治験において高頻度に認められる有害事象であり、その評価が求められている。近年、小腸陰窩に存在する小腸幹細胞の培養方法が確立されたことにより、当該細胞およびその分化細胞は、薬物による消化管有害事象を評価するための in vitro 小腸モデルとして期待されている。本講演では、我々の最近の研究成果として、抗がん剤チロシンキナーゼ阻害剤（TKI）を対象として，① 小腸幹細胞に対する EGFR チロシンキナーゼ阻害による増殖抑制，② ALK/ROS1 TKIs による Enterochromaffin 細胞への分化を誘導した小腸オルガノイドからのセロトニン放出作用に基づいた嘔吐リスクの評価について紹介する。In vitro で取得した安全性データを in vivo と関連づけるため、対照化合物であるForskolin に対して、TKIs のセロトニン放出能を相対的に定義（FSK40）した。嘔吐が認められた試験におけるTKIの最大血中遊離型濃度または投与量と FSK40 との比を嘔吐の発現率と比較したところ、投与量/FSK40 との間には正の相関が認められた。この結果から、本手法を用いることで新規化合物の嘔吐発現リスクの予測が可能であると考えられる。また、嘔吐等の消化管障害は非臨床段階でも発生することから、実験動物の小腸幹由来細胞を用いた in vitro 安全性評価試験は，毒性を回避した化合物の設計・開発にも貢献できる可能性がある。

近年、細胞間の情報伝達手段の一つとして、細胞から分泌されるエクソソームが注目されている。エクソソームは細胞間だけでなく、血液を含む体液中にも存在し、全身を循環している。また、エクソソーム内には細胞特異的なRNAが含まれていることから、腫瘍細胞由来のエクソソームをバイオマーカーとして活用することで、早期がん診断が可能になっている。さらに、エクソソームは毒性評価における新規バイオマーカーとしての有用性も期待されている。そこで我々は、肝毒性モデル化学物質をマウスに投与し、血中エクソソームRNAの解析を行うことで、新規の肝毒性指標となるエクソソームRNAを複数単離することに成功した。しかし、これらのエクソソームが肝臓から分泌されたものなのか、それとも他の臓器由来なのかを直接的に証明することは困難であった。そこで、エクソソームの由来臓器を特定可能な遺伝子改変マウスを作製することを試みた。具体的には、Creリコンビナーゼ誘導性のヒトCD9-EGFPをRosa26遺伝子座にノックイン（KI） したマウスを作製し、これを Alb-Creトランスジェニックマウス と交配させることで、肝細胞特異的にヒトCD9-EGFPを発現するマウス を樹立した。次に、このマウスに肝障害を誘導するための肝毒性物質である四塩化炭素（CCl₄） を投与し、対照群には溶媒（corn oil） を投与した。その結果、対照群では血清中エクソソームのうちヒトCD9陽性のものは1%未満であったのに対し、CCl₄投与群ではヒトCD9陽性エクソソームの割合が7%に増加 していた。この結果は、肝障害に伴い肝臓由来エクソソームの動態が大きく変化すること を示しており、さらに肝毒性バイオマーカーとしての有用性を示唆している。"

抗体医薬品、細胞医薬品、mRNAワクチンなど急速に普及しつつあるモダリティにおいて、薬効・安全性双方の観点から、作用の主体である外来蛋白質に対するヒトの免疫反応を予測し、適切に対処することは依然として極めて重要である。抗体医薬品のヒトにおける免疫原性は、未だ解決すべき問題であり、非臨床段階での有効性予測や最適化は容易でない。これまで主にin silico解析やヒト細胞を用いたin vitro評価系、および非ヒト霊長類がヒト免疫応答の予測に用いられてきたが、ヒトと動物の免疫系の違いゆえ、有用かつ扱いやすいin vivoモデル系がないことが課題であった。この課題を解決する鍵となり得るのが、免疫系遺伝子群ヒト化動物だが、その構築には、1Mbを超える長大なヒト遺伝子座を無傷の状態で動物個体に導入可能な技術が必要である。例えばヒトで観察される多様なヒト抗体/BCRレパトワをマウスで再現するには、ヒトIg重鎖（1.25Mb）、軽鎖κ（1.82Mb）、軽鎖λ（1.05Mb）遺伝子座全長をマウスに導入することが望ましいが、これは従来のTg作製法では困難であった。我々は染色体導入(TC; trans-chromosomic)動物作製技術を世界に先駆けて開発し、無傷のヒトIg重鎖、軽鎖遺伝子座全長を安定的に保持し、完全ヒト抗体を産生するマウス（TC-mAbマウス）の作製に世界で初めて成功した。本シンポジウムでは独自の染色体工学技術開発の歴史、薬物動態モデル動物による低分子化合物の薬物動態・毒性予測、完全ヒト抗体を産生する動物による免疫源性予測法の開発などについて紹介し、さらに進化（深化）した独自の染色体工学技術による、ヒト化トランスクロモソミック(TC)マウス群の開発の現状と毒性研究への応用の可能性を紹介する。

2023年末に世界最高水準の高磁場MRI（11.7 Tesla、22-cm bore）を導入した。MRIとして生体から光学的な断面情報を得る能力（空間分解能）が向上するだけでなく、生体局所に関心領域（ROI）を設定し、脳だけでなく肝臓や消化管からもMR Spectroscopy (MRS)の情報を収集することが可能である。生体内の代謝物はその構造（官能基）に特異的な化学シフトを有しており、強大な静磁場をかけることによって検出することができる。また同一個体において経時的に病態を追跡できることが大きな特色である。我々の研究所では超免疫不全（NOG）マウスを用いたヒト由来細胞の再構成系を駆使した研究、あるいは神経変性疾患モデルとして遺伝子改変マーモセットを利用した研究を推進してきた。特にアルツハイマー病研究では神経細胞死とグルコース利用の低下の関係に注目が集まっている。がん組織におけるグルコースや乳酸の代謝異常（Warburg効果）と、神経細胞とグリア細胞の相互作用には興味深い類似性があり、がんの化学療法耐性の分子機構制御薬の中には、マウスのアルツハイマー病モデルで一定の効果を示すものも報告されつつある。即ち既存の抗がん剤候補薬の中にマウス認知症モデルで効果を発揮しうる可能性のある薬も見いだされつつある。しかしヒトにフィードバックできる高次脳機能異常を制御できる医薬のエビデンスは研究の途上にある。今後遺伝子改変マーモセットモデルによる神経変性疾患の研究や、小児薬理の研究などにMRI/MRSの応用が期待できる。講演ではIn vivo実験医学の進捗と高磁場MRIから得た最新の成果を紹介したい。(参考文献）Sato K, et al. Lab Anim (2024) : Minhas PS, et al. Nature (2021): Minhas PS, et al. Science (2024): Yamamoto T, et al. Cancer Res (2024)

⽇本内分泌撹乱物質学会は、鯉淵 典之会長の下、学会名を変更し，社会への発信を強化すると共に，より魅力ある学会になるべく改革を続けて参り、他学会との合同大会の開催の試みを通して日本撹乱物質学会のアイデンティティーの確保の重要性にも配慮し単独開催を念頭に学会大会を運営しつつ、従来の連携の主体となっていた化学物質側のテーマ、曝露評価側のテーマに加え、生体側のテーマ、例えば、「シグナル毒性」の重要な標的であると考えられる「中枢神経系の発生発達期」を主対象とした「子どもの毒性学」については、日本毒性学会等の生物学的研究が根幹にある諸学会との連携を進めようとしています。その一環として、本第52回日本毒性学会においては、日本毒性学会・連携小委員会および黄基旭学術年会長のご尽力により、⽇本内分泌撹乱物質学会・⽇本毒性学会合同シンポジウムを下記のごとく２枠企画出来ることとなりました。１「内分泌撹乱作⽤の評価試験法の多様性と共通性」は、in vitro、ミジンコ、魚類、げっ歯類の試験法について、２「⼦どもの毒性学ー化学物質曝露による⼦供の⾼次脳機能への有害影響の認知の現状」は、げっ歯類における発生発達影響、継世代影響と、ネオニコチノイドを切り口としての人における高次脳機能等への影響の実態のその分子背景について、をそれそれ取り上げる。この合同企画を契機に、更なる生物科学的な連携が深まることを祈念するものです。

近年、環境中に放出される化学物質が生物のホルモン系に影響を及ぼし、生殖異常や成長阻害を引き起こす内分泌撹乱作用が懸念されています。そのため、内分泌撹乱物質（EDCs: Endocrine Disrupting Chemicals）のリスク評価を目的とした試験法の開発が求められています。本講演では、魚類を用いた内分泌撹乱作用の評価試験法について、最新の研究動向を踏まえて紹介します。魚類は、環境中の化学物質に直接曝露される場合が多く、内分泌系への影響を感受しやすいことから、EDCsの影響評価に適したモデル生物とされています。特に、ゼブラフィッシュ（Danio rerio）やメダカ（Oryzias latipes）などの小型魚類は、短い生活環、遺伝学的解析の容易さ、および実験室内での飼育の容易さから、広く試験に用いられています。EDCsは個体を死にいたらしめませんが、その繁殖力に影響して個体群の減少を起こすため、急性毒性を主体とした従来の試験法は使えず新たな試験方法を開発する必要がありました。現在、魚類を用いた内分泌撹乱作用の評価試験法には、ビトロ（in vitro）試験、短期スクリーニング試験、および長期試験（ライフサイクル試験や多世代試験）があります。ビトロ試験では、化学物質がエストロゲン受容体やアンドロゲン受容体に結合する能力を評価し、短期スクリーニング試験では、魚類の性転換や卵黄タンパク質（VTG: Vitellogenin）誘導、産卵数の低下などの生物学的指標を測定します。さらに、長期試験では、曝露2世代目の成長・成熟。生殖成功率や個体群レベルでの影響を評価し、EDCsの長期的な影響を明らかにします。本講演では、魚類を用いた内分泌撹乱作用の評価試験の現状と課題、試験結果の解釈、ならびに規制動向について説明します。特に、化学物質の曝露方法や濃度設定、種間差、動物福祉の問題など、今後の研究課題についても考察します。

　我々の生活活動によって環境水中に排出された化学物質は、生物に取り込まれることで内分泌機構を含む生命機能を撹乱し、深刻な影響を及ぼすことがある。そのため、化学物質のリスクを正確に測定・評価することが極めて重要である。　淡水性動物プランクトンのミジンコは、湖沼生態系において一次生産者（植物プランクトン）と高次消費者（魚など）をつなぐ重要な役割を果たし、湖沼環境の安定化に不可欠である。ミジンコは好適環境下ではメスのみで単為生殖を行うが、環境が悪化するとオスを産生し、有性生殖へと生殖戦略を転換する。この環境悪化に応じたオス産生（環境依存型性決定）の精密な制御は、ミジンコの繁栄にとって重要である。しかし近年、昆虫ホルモンの一種である幼若ホルモン（JH）や、殺虫剤として使用されるJH類似物質への暴露が、ミジンコの性決定を撹乱し、仔虫がオスとなることが明らかになった。これはミジンコ個体群および湖沼生態系の崩壊につながる可能性のある深刻な内分泌撹乱の事例である。講演者はJHによるミジンコの性決定の撹乱の分子機構の解析に着手し、JHが標的とする受容体分子を同定した。さらに、この受容体分子を用いたレポーターアッセイシステムを整備し、従来の生物試験よりも簡便・安価・迅速にJH活性を示す分子を検出できるin vitro毒性試験法を確立した。　また最近では、高分子およびその分解産物の生物影響の解明にも取り組んでいる。高分子材料は生物体内外で時間とともに分解され、物理化学的に異なる性質を持つ分解産物へと変化する。講演では、これらの高分子およびその分解産物がミジンコに与える毒性影響とその作用機序、さらにはそれらを評価する試験法についても、最新のデータを紹介する。

脳の正常な発達には、適切な時期に適切な量の甲状腺ホルモン（TH）が必要である。胎児のTH産生は未熟なため、母親からの供給に大きく依存している。臨床研究によると、周産期の母体の甲状腺ホルモンのかく乱（THD）は、子供の脳の発達にリスクをもたらす可能性があり、環境化学物質がその一因となることが懸念されている。従来の毒性試験は主に甲状腺の重量と病理組織学的検査によってTHへの影響を評価してきたが、OECDは最近、経口投与での毒性試験において血中TH濃度の測定を義務付けた。しかし、科学的な不確実性は依然として残っている。脳の発達に対する潜在的なリスクを適切に回避するためには、以下の点について議論する必要があると考える：1) 成熟動物の血中TH濃度の把握がどの程度有効か、2) 発達中の児動物でのTHDはどの時期にどの項目で評価すべきか、3) 脳を保護するためのTHDの閾値を設定する実現可能性。近年、動物福祉と安全性評価の効率化が注目される中、THDのAdverse Outcome Pathwaysの早期イベントへの影響を調べるために複数のインビトロ試験が開発されている。しかし、現行の規制では、インビトロ試験の結果だけで結論する状況には至っていない。我々は証拠の重み付けアプローチに焦点を当て、母ラットとその児の血中TH濃度を調べるための短期間のインビボ試験であるComparative Thyroid Assay（CTA）に関して、血中THDの下流効果として、脳のTH濃度と異所性神経細胞巣（脳TH減少の脳組織病理学的指標）を追加検査することで使用する動物の数を減らす改良型CTAを提案している。この発表では、周産期THDによる発達神経毒性リスクを適切に評価するために、用量反応と閾値の問題に対処することも含め、インビトロ試験およびインビボ試験の両方を考慮した包括的な評価の必要性を考察したい。

発達神経毒性（Developmental Neurotoxicity：DNT）は、胎児期および生後発達期における化学物質や重金属などの曝露により神経系の構造および機能に対する有害作用のことである。DNTを持つ化学物質は多数知られており、水俣病の原因として知られるメチル水銀、ポリ塩化ビフェニル(PCB)、医薬品のバルプロ酸やフェニトインなど多数が知られている。本講演では、近年注目され発達神経毒性の有無について議論されている有機フッ素化合物（PFAS）について本研究室で実施している様々なin vitro/in vivo試験法を実際の研究データとともに紹介する。PFASの一種であるPFOSの発達神経毒性を in vivo/in vitro 研究で解析した。in vivo研究 では、妊娠マウスにPFOSを経口投与し、乳汁を介した仔マウスの曝露を検討した。その結果、成獣マウスで記憶学習、協調運動、運動学習の異常が観察され、シナプス可塑性の低下が示唆された。小脳の電気生理学的解析では、短時間の Paired-pulse facilitation（PPF）や 長期抑圧（LTD）の減弱、シナプス伝達関連タンパク質の発現変化が確認された。in vitro研究 では、PFOSの脳発達への影響を初代培養プルキンエ細胞を用いて解析した。ラット由来のプルキンエ細胞に甲状腺ホルモン（T4, T3）とPFOSを曝露した結果、T4との共曝露群でのみ樹状突起形成が阻害された。一方、T3との共曝露では影響が見られず、PFOSが 2型脱ヨード酵素（DIO2） を介して甲状腺ホルモンの作用を攪乱する可能性が示唆された。さらに、D2活性の低下も確認され、PFOSによる甲状腺ホルモン経路の攪乱が脳発達に影響を与える可能性が示された。本研究により、PFOSの母体曝露が乳汁を介して仔マウスの脳発達に影響を及ぼし、その影響が成獣期まで持続することが明らかとなった。DIO2活性の低下が関与する可能性があるものの、詳細な影響機構は未解明でありさらなる検証が必要である。

ネオニコチノイド系殺虫剤は、ニコチン性アセチルコリン受容体作動薬である。1990年以降にイミダクロプリド、アセタミプリド、ニテンピラム、2000年以降にチアメトキサム、チアクロプリド、クロチアニジン、ジノテフラン、2016年以降にフルピラジフロン、スルホキサフロル、トリフルメゾピリム、フルピリミンが農薬登録されており、ほぼ同様の作用機序と毒性をもつ。有機リン系殺虫剤と比べて、哺乳類に対する急性影響が少ないことから、農林業や公衆衛生分野の害虫駆除に好んで用いられてきた。と同時に、標的外の無脊椎動物、両生類、爬虫類、鳥類、微生物、哺乳類に対する負の影響が、報告されてきた。最近の研究によれば、イミダクロプリド、アセタミプリド、チアクロプリド、クロチアニジン（チアメトキサムの活性一次代謝物）は、ヒト細胞のα7および非α7-ニコチン受容体にアゴニスト作用を有し、血液脳関門、血液精巣関門、胎盤を通過し、中枢神経、自律神経節、副腎髄質、神経筋接合部、皮膚立毛筋、汗腺、免疫細胞、表皮角質細胞、気管支上皮、血管内皮細胞、心房心内膜、膀胱、肝細胞、膵島β細胞、腎尿細管、精巣、精子、卵胞、羊膜、胎盤に作用し、負の健康影響をもたらす懸念がある。原体と代謝物の脂溶性は低いものの、環境中半減期が長く、タンパク質と結合し長期間体内に保持されるため、排泄は遅く、農薬として使用を続ける限りヒトの低濃度慢性暴露は不可避である。現実に、低濃度慢性暴露による負の健康影響が、これらのネオニコチノイドが作用する組織に対応するかたちで、疫学研究でも動物実験でも、大人でもこどもでも、示されている。使用を続ける限り、健康影響を受ける人は増えていき、社会を内側から崩壊させる要因となっていく。環境半減期の長い受容体作動薬を安全に使用するには、環境中に投入する速度を規制するしかない、という毒性学の基本に立ち返る時が来ている。

ネオニコチノイド系殺虫剤は1980～90年代に開発され，世界で広く使われている農業用・家庭用殺虫剤である。市販されているネオニコチノイドとしてアセタミプリド（ACE），ジノテフラン（DIN），イミダクロプリド（IMI）などがある。我が国の健康な妊婦の80％以上でネオニコチノイドが検出され，ネオニコチノイドの胎盤透過性が明らかになっている。胎児がネオニコチノイドに曝露されているならば，ニコチン性アセチルコリン受容体アゴニストとしての特性を通じた発達毒性が児にあらわれることも懸念される。しかし，ネオニコチノイドの発達毒性を議論するためのヒトデータは限られており，知見も一貫していない。浜松母と子の出生コホート研究（Takagai et al, Int J Epidemiol 2016）は，浜松市近郊で2007～12年に生まれた1258名の新生児を15年以上追跡する疫学研究である。神経発達の詳細な評価を通じて神経発達症（発達障がい）の成り立ちを明らかにすることを目的に運営されている。本研究では，このコホートで集められた臍帯血血清検体と神経発達データを利用して，胎児期のネオニコチノイド濃度と，生後1，4，6，10，14，18，24，32，40カ月における神経発達，8～9歳における神経発達症症状（注意欠如多動症，自閉スペクトラム症）との関連を検討する。200名の児の臍帯静脈血血清のネオニコチノイド濃度を計測したところ，ACEの代謝物であるacetamiprid-N-desmethyl (dm-ACE)およびDINは50％以上の検体で検出された。dm-ACE濃度が高いと1歳までの視覚受容機能，微細運動機能において発達が遅延する傾向がみられたが，1歳以降は見られなかった。DINは神経発達との関連を示さなかった。

近年，内分泌かく乱化学物質（EDCs）への曝露が発達期の高次脳機能に影響を及ぼし，とくに次世代以降への影響も含めた長期的なリスクとして注目されている．本講演では，マウスモデルを用いた農薬の継世代影響の評価について，とくにエピゲノム毒性に焦点を当てて紹介する．本研究では，親（F0），子（F1），孫（F2），曾孫（F3）の4世代にわたる解析を行い、曝露の影響が非曝露世代にまで及ぶかを詳細に検討した．EDCs曝露による生物学的影響を包括的に解析するため，トランスオミクス解析を活用し，複数の分子層にわたる変化を統合的に評価した．とくに，次世代シーケンシング（NGS）を用いたトランスクリプトーム解析により，神経機能関連遺伝子の発現変動を詳細に解析し，エピゲノム異常との関連を検討した．また，内分泌解析や組織学的解析を組み合わせることで，内分泌系の変化と脳構造への影響を明らかにした．さらに，曝露による行動への影響を評価するため，認知・情動機能を対象とした行動試験を実施した．具体的には，オープンフィールド・高架式十字迷路試験，バーンズ迷路試験，高架式プラットホーム試験，明暗箱試験，尾懸垂・強制水泳試験などの各種行動評価手法を導入し，曝露マウスの学習・記憶能力や情動行動の変化を詳細に解析した．その結果，特定の農薬曝露により認知機能の低下や情動異常が観察され，それらの影響が次世代以降にも伝播することが示唆された．本研究は，EDCsがエピゲノム修飾を介して継世代的に高次脳機能に影響を及ぼしうることを示すものであり，子どもの神経発達期における化学物質曝露のリスクを考慮する上で新たな視点を提供する．本講演では，これらの知見を基に，EDCsのエピゲノム毒性を含む継世代影響のメカニズムを議論し，子どもの健康を守るため今後の毒性学研究の展望を考察する