発芽キヌアChenopodium Quinoaのアミラーゼの精製および性状

抄録

【目的】キヌアChenopodium Quinoa発芽種子アミラーゼの分離，精製を行い，主要な発芽種子アミラーゼの性状を明らかにすることを目的とした．キヌアの発芽過程におけるデンプン生成物の様相を確認し，アミラーゼの特性を調べ，キヌアの利用法について検討した．【方法】試料は，ボリビアのウユニ塩湖近隣の高地で栽培されたロイヤルキヌア（DM三井製糖株式会社）の種子を使用した．暗所20℃で，7日間発芽させたキヌア種子10gに20倍容の0.1Mリン酸緩衝液（pH7.0）を加えて，ヒスコトロンでホモゲナイズ（3分間，氷水中）し，組織を摩砕後，4℃で1時間撹拌し，抽出液を調製した．抽出液を硫安塩析（80％飽和）し，沈殿画分を溶解，透析して粗酵素液とした． DEAE-Sepharoseクロマトグラフィーを行い，0.7M塩化ナトリウム溶液によるグラジェント勾配法により溶出し，精製を行い，アミラーゼ活性およびＵＶ法によりタンパク質量を測定した．α-アミラーゼ活性はBlue-Value法，β-アミラーゼ活性は Somogyi-Nelson法を用いた．最適温度（30～60℃）および最適pH（pH5.0～8.0）を測定し，アミラーゼに対する各種試薬の影響について調べた．【結果】キヌア発芽種子のアミラーゼをDEAE-Sepharoseにより精製したところ，アミラーゼ活性は主に3つのピークが得られた．各ピークにおけるアミラーゼの最適温度は，Ⅰ，Ⅱ，Ⅲともに40℃で最も高い活性を示した．最適pHはⅠでは6.0，Ⅱでは7.0，Ⅲでは6.0で最も高い活性を示した．Ⅰ，Ⅱ，Ⅲともに HgCl₂，PCMB，ヨード酢酸により活性が阻害されたことから，活性発現にSH基が関与することが推察された．※試料を提供してくださったDM三井製糖株式会社様のご協力に感謝申し上げます．