D クライオプレート法によるカキ冬芽茎頂の超低温保存

抄録

超低温保存は，植物遺伝資源の長期保存法として有効な手法となっている．カキ‘西条’（Diospyros kaki Thunb.）の冬芽から摘出した茎頂を用いて，乾燥法による新しい超低温保存法である D クライオプレート法による超低温保存法を検討した．2013 年 1 月に島根大学農場より冬芽を付けた休眠枝を収集し，2°C で貯蔵した．表面殺菌後，1 mm の大きさに調整した茎頂を冬芽から摘出し，0.3 M ショ糖を含む 1/2MS 固形培地に置床し，25°C で一晩の前培養を行った．その後，アルミニウムクライオプレートのウエルに茎頂を入れ，アルギン酸カルシウムで固着させた．LS 液（2 M グリセリン + 1.0 M ショ糖を含む 1/2MS 培地）に茎頂を付着したクライオプレートを 25°C で 30 分間入れ，凍害防御処理を行った．クリーンベンチ内に茎頂を付着させたクライオプレートを置き，30–90 分間の風乾を行い，液体窒素で直接冷却した．1.0 M ショ糖を含む 1/2MS 液体培地にクライオプレートを入れ，25°C で 20 分間の昇温を行った．本実験では 0.3 M ショ糖による前培養による再生率向上効果は認められなかったが，他の品種への応用やジーンバンクでの実用面を考えると D クライオプレート法の手順に加えるべきと思われる．高い再生率（84％）は30 分間の乾燥時間で得られ，この条件で他の 10 品種のカキで比較したところ，67–97％の再生率となった．冬芽は高い低温耐性を持つことから，冬芽を用いた D クライオプレート法はカキの超低温保存に有効な方法であると考えられる．