PCR法によるEntamoeba complexの高感度検出―高解像度融解曲線（PCR-HRM）解析と各種PCR法の比較検討―

抄録

5類感染症に分類されるEntamoeba histolyticaは，非病原種であるE. dispar，E. moshkovskiiと鑑別する必要があるが，顕微鏡検査では難しい。しかし，PCR法はE. histolyticaを特異的・高感度に検出することが可能で，その技術は従来のPCRからリアルタイムPCRに推移している。今回，我々はリアルタイムPCRを更に展開させたPCR-HRM解析を用いてEntamoeba complexの高感度検出を検討し，今まで数多く報告されているマルチプレックスPCR，アレル特異的PCR，アレル特異的リアルタイムPCR，2段階リアルタイムPCRと比較した。その結果，増幅産物のサイズが大きくなるとPCRの増幅効率が低下するため，マルチプレックスPCRの検出感度は他法より劣った。一方，増幅産物のサイズを小さくすると，何れのPCR法でも十分な検出感度が得られ，コンタミネーションの危険性を冒してまで2段階PCRを行う必要は無かった。PCR-HRM解析とリアルタイムPCRは，リアルタイムPCR装置を使用するため反応チューブの蓋を開ける必要が無い。そのため，コンタミネーションの危険性が非常に低く，結果報告時間も短縮できた。更にPCR-HRM解析は1本のチューブで検査できるためランニングコストが安価で，Entamoeba complex 3種以外の種も検出できる優れた方法である。