マウス雄核発生胚由来栄養膜幹細胞から分化した細胞の特性

抄録

【目的】胎盤形成における雌雄ゲノムの役割を明らかにするために，我々は雄核発生胚から栄養膜幹細胞（ＴＳ細胞）を樹立した。雄核発生胚由来ＴＳ細胞（ＡＴＳ細胞）は分化誘導後，栄養膜巨細胞（ＴＧ細胞）特異的遺伝子を発現したことから，ＴＧ細胞への分化には雄ゲノムが関与していると考えられた（Ｏｇａｗａ　ｅｔ　ａｌ．，２００９）。同年，母方発現インプリント遺伝子であるＰ５７／ｋｉｐ２を欠損したＴＳ細胞が樹立された（Ｕｌｌａｈ　ｅｔ　ａｌ．， ２００９）。この細胞は分化誘導後ＴＧ細胞特異的遺伝子を発現するが，核の巨核化が認められなかった。さらに，分化誘導後も細胞は増殖を続け，分化誘導後１０日目にはほぼ全ての細胞の核が多核化を示すことが報告された。これにより，ＴＧ細胞への分化には雌ゲノムが重要であることが示唆された。そこで本研究では，ＡＴＳ細胞がＴＧ細胞へ分化しているのかを明らかにするため，分化誘導後の細胞の特性を調べた。【方法】ＡＴＳ細胞２株を供試した。また，コントロールとして受精卵由来ＴＳ細胞を用いた。分化誘導後０～６日目におけるＰ５７／ｋｉｐ２及びＴＧ細胞特異的遺伝子の発現解析をＲＴ－ＰＣＲにより行った。また，同時期の細胞を回収し，細胞の増殖率の算出及びＦＡＣＳを用いたＤＮＡ量の測定を行った。さらに，分化誘導後１０日目の細胞における多核化細胞の出現について観察した。【結果】分化誘導後，ＴＳ細胞ではＰ５７／ｋｉｐ２の発現が見られたが，ＡＴＳでは発現が抑制されていた。しかし，ＴＧ細胞特異的遺伝子の発現はＴＳ細胞同様，分化誘導後に上昇が見られた。また，ＡＴＳ細胞では分化誘導後も細胞の増殖能が維持され，４Ｎ以上の細胞の出現に遅延が見られた。一方，ＡＴＳ細胞における多核化細胞の出現率はＴＳ細胞と同様低率であった。以上から，ＡＴＳ細胞は分化誘導後，ＴＧ細胞特異的遺伝子の発現と，細胞の増殖性についてはＰ５７／ｋｉｐ２欠損ＴＳ細胞と似た特性を示すが，細胞は多核化せずに巨核化すると考えられた。