フォルスコリンとIBMXの前培養がマウス体外成熟卵子の核成熟，紡錘体形態および体外受精後の胚発生に及ぼす影響

抄録

【目的】体内では，LHサージに伴い，卵丘細胞のcAMP濃度は急激に増減する。体外成熟(IVM)では，卵子のcAMP制御が発生能に影響する。そこで，本研究では，cAMP量を増加させるforskolin (FSK)とcAMP分解酵素ホスホジエステラーゼの阻害剤IBMXによるIVM前培養(pre-IVM)が核成熟，紡錘体形態，体外受精(IVF)後の胚発生に及ぼす影響を調べた。【方法】3週齢ICR雌マウスにPMSG投与後48hに未成熟卵子を採取した。pre-IVM区では50 μM FSK+50 μM IBMXで1h前培養を行い，cIVM区では前培養をしない，通常のIVMとした。IVM培地はαMEM+0.3% BSA+0.1% fetuin+5 ng/ml EGFとした。紡錘体はLC-PolScopeで観察した。［実験1］GVBD率とMII率の経時的な推移を調べた。［実験2］MII期の紡錘体面積を調べた。［実験3］IVM後15，21hのIVFによる胚発生を調べた。【結果】［実験1］cIVM区とpre-IVM区におけるIVM後1，2，3h のGVBD率は，各88，96，90％と各27，85，97％となり，pre-IVM区ではGVBDが遅くなった。IVM後7，9，11，13h のMII率は，各0，81，93，100％と各3，79，100，100％となり，同様であった。［実験2］cIVM区とpre-IVM区におけるIVM後15，18，21hにおける紡錘体面積は，各179，183，194 μm²と各156，164，172 μm²となり，pre-IVM区の紡錘体面積は小さく，排卵卵子の紡錘体面積158 μm²と同様であった。［実験3］cIVM区とpre-IVM区におけるIVM後15，21hの胚盤胞率は各29，9％と各41，10％となり，15hではpre-IVM区の胚盤胞率が有意に高かった。【結論】FSK+IBMXのpre-IVMを行うことで，MII期の紡錘体面積は小さくなり，IVF後の胚盤胞率も高くなった。