ATP-プリン受容体シグナリングによるAVPVキスペプチンニューロン由来不死化細胞株活性化の検討

抄録

【目的】げっ歯類において前腹側室周囲核（AVPV）キスぺプチン（Kp）ニューロンは，GnRH /LHのサージ状分泌を司る排卵中枢であると示唆される。我々は先行研究において，ラットAVPV Kpニューロンにはプリン受容体の一つであるP2X2受容体遺伝子（P2rx2）が発現し，プリン作動性ニューロンがAVPV Kpニューロン近傍に投射すること，プリン受容体拮抗剤をラットAVPV近傍に投与すると内因性LHサージが完全に消失することを明らかにし，AVPV KpニューロンにおけるATP-プリン受容体シグナリングがGnRH/LHのサージ状分泌の誘起に関与することを示唆した。本研究では，ATP-プリン受容体シグナリングによりAVPV Kpニューロンが直接刺激されるか否かを解明するため，マウスAVPV由来Kpニューロン不死化細胞株を用い，ATP添加により同細胞株が活性化するか否かを細胞内Ca²⁺濃度を指標として検討した。【方法】ラットAVPV組織およびマウスAVPV由来Kpニューロン不死化細胞株（mHypoA51）におけるP2rx2 mRNA発現にエストロジェンが及ぼす影響を定量的PCRによって調べた。次に，E2を添加した培地で4時間培養したmHypoA51にATP（100 µM）を添加し細胞内Ca²⁺濃度の変化を確かめた。【結果と考察】ラットAVPV組織およびmHypoA51細胞株においてP2rx2発現が認められ，エストロジェンによりP2rx2発現が増加する傾向がみられた。また，mHypoA51へのATP添加により，一過性の細胞内Ca²⁺濃度の上昇が認められたことから，ATPによる神経活動の活性化が示された。これらの結果から，AVPV Kpニューロンは，ATP-プリン受容体シグナリングにより直接刺激され，GnRH/LHサージを制御することが示唆された。今後は，P2X受容体拮抗剤やsiRNAを用い，外因性ATP添加によるmHypoA51の細胞内Ca²⁺上昇が抑制されるか否かを確認する予定である。